古朵新聞| DEAE-瓊脂糖凝膠FF的使用方法?

　　DEAE-瓊脂糖凝膠FF

　　產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

　　DEAE-瓊脂糖凝膠FF 是將二乙胺基乙基鍵合在快流速瓊脂糖凝膠上形成的一種弱陰離子交換介質(zhì)，具有優(yōu)異的流動(dòng)性能，廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的離子交換制備。

　　1 理化指標(biāo)

　　項(xiàng)目指標(biāo)

　　離子交換基團(tuán)-O-CH2CH2-N+(C2H5)2H

　　離子交換類型弱陰離子，可交換離子Cl-

　　基質(zhì)6%交聯(lián)瓊脂糖

　　蛋白質(zhì)吸附容量95mgHSA/ml 介質(zhì)

　　總離子交換容量0.09~0.13 mmol/ml 介質(zhì)

　　粒徑45~165 μm

　　最大流速* 300cm/h

　　工作溫度4~40℃

　　耐壓0.3 MPa

　　pH 穩(wěn)定性1~14 (短時(shí)間);3~12 (長(zhǎng)時(shí)間)

　　pH 工作范圍2~9

　　化學(xué)穩(wěn)定性

　　所有常用的水相緩沖液;0.1mol/L 氫氧化鈉;

　　*檢測(cè)條件： 層析柱16mm×100mm *柱床高5cm，25℃，流動(dòng)相為0.1mol/LNaCl。

　　2 貯存

　　產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在4℃~25℃(保存溶液為20% 乙醇)，通風(fēng)、干燥、清潔的地方。不能冷凍。用過(guò)的柱子貯存在4℃(20% 乙醇)。

　　3 應(yīng)用

　　本產(chǎn)品具有高化學(xué)穩(wěn)定性、高流速、高載量、好的機(jī)械性能、可在位清洗、多次重復(fù)使用等特點(diǎn)，非特異性吸附低，回收率高，適用于工業(yè)規(guī)模生物試劑，適用于在pH 工作范圍內(nèi)可形成負(fù)離子的生物大分子的分離純化，廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的離子交換制備。

　　4 使用方法

　　4.1 裝柱

　　1)將所有實(shí)驗(yàn)材料均需平衡至進(jìn)行色譜層析操作的溫度;

　　2)實(shí)驗(yàn)所需要用到的緩沖液以及洗脫液進(jìn)行脫氣處理;

　　3)DEAE-瓊脂糖凝膠FF 的儲(chǔ)存液為20%乙醇，需要用去離子水*清洗掉保存液。

　　4)在柱子下端加入純水裝柱子，以排除氣泡，將填料連續(xù)倒入柱子時(shí)，要用玻璃棒緊靠柱子內(nèi)壁引流，以減少氣泡的產(chǎn)生，讓填料先自然沉降到填料體積不再變化，用上樣的平衡液平衡柱后即可上樣。

　　4.2 平衡

　　讓平衡緩沖液以一定流速流過(guò)柱子，到流出液電導(dǎo)和pH 不變。平衡液是低濃度的緩沖溶液，如Tris 、PBS 等。

　　4.3 上樣

　　(1)樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過(guò)濾后上樣。鹽濃度太大的樣品處理后再配。

　　(2)一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。

　　(3)介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附的程度取決于樣品的帶電性質(zhì)、流動(dòng)相的離子強(qiáng)度和pH 值。鹽濃度小，介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附較牢。用DEAE 介質(zhì)時(shí)，推薦的pH 值是至少大于目標(biāo)產(chǎn)品等電點(diǎn)1 個(gè)單位。

　　4.4 洗脫

　　DEAE 介質(zhì)可用增大鹽濃度或減小pH 值進(jìn)行洗脫，常用增大鹽濃度的辦法洗脫。

　　4.5 再生一般用高鹽濃度的緩沖液(含1~2mol/L NaCl)洗或減小pH 洗10 倍以上柱體積，接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉，可用在位清洗(CIP)除去。

　　4.6 在位清洗

　　(1)對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可以用2M Nacl 去除。

　　(2)對(duì)沉淀蛋白、對(duì)以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類，可用0.1M NaOH 去除。

　　(3)對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等，用4~10 倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。清洗完畢后，用至少10 倍緩沖液平衡柱子。

　　4.7 注意

　　在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候，要避免柱子流干，氣泡進(jìn)入。

　　注意事項(xiàng)：

　　1. 上樣之前，樣品必須經(jīng)過(guò)膜過(guò)濾及去除色素，否則雜質(zhì)及色素會(huì)被吸附到填料上，影響填料的正常使用。

　　2. 在使用過(guò)程中，避免使用高濃度的強(qiáng)酸強(qiáng)堿，酸和堿的濃度應(yīng)低于0.15 摩爾。堿會(huì)使流速變慢。

　　3. 離子交換介質(zhì)在選擇層析柱時(shí)，避免使用細(xì)長(zhǎng)柱，會(huì)增加實(shí)驗(yàn)操作壓力。

　　4. 不同的樣品，平衡，吸附和洗脫方法不相同，可以根據(jù)相關(guān)的文獻(xiàn)進(jìn)行。

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