粒體檸檬酸( MCA)含量試劑盒說明資料

　　線粒體檸檬酸(Mitochondrion Citric Acid, MCA)含量 試劑盒

　　英文名稱：Mitochondrial citric acid(MCA) Content Assay Kit

　　別名：線粒體檸檬酸含量測(cè)定試劑盒 MCA Kit 線粒體檸檬酸(MCA)含量測(cè)定試劑盒 線粒體檸檬酸(MCA)含量測(cè)試盒

　　檢測(cè)方法：常量法

　　規(guī)格：

　　25管/24樣

　　25管/48樣

　　產(chǎn)品詳細(xì)介紹

　　測(cè)定意義：

　　CA是線粒體三羧酸循環(huán)的個(gè)中間產(chǎn)物，由檸檬酸合酶催化乙酰CoA與草酰乙酸合成，其含量是三羧酸循環(huán)強(qiáng)度的主要指標(biāo)之一。

　　配合測(cè)定丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性、乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和CA含量，其中(1)丙酮酸含量和丙酮酸脫氫酶活性變化可以反映糖酵解進(jìn)行程度，(2)綜合分析丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性和乙酰CoA含量變化可以反映脂肪酸β-氧化途徑提供的乙酰CoA情況，(3)乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和CA含量變化可以反映三羧酸循環(huán)進(jìn)行狀況。

　　測(cè)定原理：

　　CA在檸檬酸裂解酶的作用下，生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性條件下，α-酮酸進(jìn)一步與苯肼反應(yīng)，生成相應(yīng)的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在330nm處有吸收峰，該波長(zhǎng)下吸光度的變化程度可反映出CA的含量。

　　產(chǎn)品說明書

　　規(guī)格：25 管/24 樣

　　線粒體檸檬酸(Mitochondrion citric acid, MCA)含量試劑盒說明書

　　分光光度法

　　正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

　　測(cè)定意義：

　　CA 是線粒體三羧酸循環(huán)的個(gè)中間產(chǎn)物，由檸檬酸合酶催化乙酰 CoA 與草酰乙酸合成， 其含量是三羧酸循環(huán)強(qiáng)度的主要指標(biāo)之一。 配合測(cè)定丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性、乙酰 CoA 含量、檸檬酸合酶活性和 CA 含量， 其中(1)丙酮酸含量和丙酮酸脫氫酶活性變化可以反映糖酵解進(jìn)行程度，(2)綜合分析丙酮 酸含量、丙酮酸脫氫酶活性和乙酰 CoA 含量變化可以反映脂肪酸β -氧化途徑提供的乙酰 CoA 情況，(3)乙酰 CoA 含量、檸檬酸合酶活性和 CA 含量變化可以反映三羧酸循環(huán)進(jìn)行狀況。

　　測(cè)定原理：

　　CA 在檸檬酸裂解酶的作用下，生成α -酮酸(草酰乙酸);在弱酸性條件下，α -酮酸進(jìn)一 步與苯肼反應(yīng)，生成相應(yīng)的α -酮酸苯腙;α -酮酸苯腙在 330nm 處有吸收峰，該波長(zhǎng)下吸光度 的變化程度可反映出 CA 的含量。

　　自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

　　分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL 石英比色皿、研缽和蒸餾水。

　　試劑組成和配制：

　　酸性提取液：液體 25mL×1 瓶，4℃保存。

　　堿性提取液：液體 25mL×1 瓶，4℃保存。

　　試劑一：液體 7.5mL×1 瓶，4℃保存。

　　試劑二：液體 2.5mL×1 瓶，4℃保存。

　　試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存;臨用前加入 7.5mL 蒸餾水充分溶解待用;用不完的試劑 4℃ 保存;

　　標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1mL×1 支，10μ mol/mL 檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。

　　線粒體中檸檬酸提?。?/p>

　　稱 0.05~0.1g 樣品(建議稱 0.1g 樣本)，加入 0.5mL 酸性提取液，冰上充分研磨，600g/min 4℃離心 5min;取上清至另一 EP 管中，11000g/min 4℃離心 10min，棄上清(取 300μ L 該上 清液和 300μ L 堿性提取液中和后可用于細(xì)胞質(zhì) CA 含量測(cè)定);沉淀即線粒體，向沉淀中加入 0.5mL 酸性提取液，充分懸浮溶解，超聲波破碎(功率 20%，超聲 3 秒，間隔 10 秒，重復(fù) 30 次)，取此溶液 300μ L 和 300μ L 堿性提取液中和，混勻，置冰上待測(cè)(不可用于蛋白質(zhì)含量 測(cè)定)。

　　測(cè)定步驟：

　　1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 330nm，蒸餾水調(diào)零。

　　2、試劑一、二和三 37℃預(yù)熱 10min。

　　3、樣本測(cè)定：

　　空白管和標(biāo)準(zhǔn)管通常只需要各做一個(gè)。

　　試劑名稱(μ L)空白管標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定管

　　試劑一300300300

　　蒸餾水300

　　標(biāo)準(zhǔn)液 300

　　樣本 300

　　試劑二100100100

　　試劑三300300300

　　充分混勻，330nm 立即測(cè)定初始吸光值 A1 和 37℃孵育 30min 后的吸光值 A2，Δ A=A2 –A1。

　　檸檬酸含量計(jì)算：

　　(1)按蛋白濃度計(jì)算

　　檸檬酸含量(μ mol/mg prot)=[C 標(biāo)準(zhǔn)管×(Δ A 測(cè)定管-Δ A 空白管)÷(Δ A 標(biāo)準(zhǔn)管-Δ A 空白 管) ×V 樣]÷(V 樣÷Cpr)=10×(Δ A 測(cè)定管-Δ A 空白管)÷(Δ A 標(biāo)準(zhǔn)管-Δ A 空白管)÷Cpr 蛋白質(zhì)含量需要另外測(cè)定。

　　(2)按樣本鮮重計(jì)算

　　檸檬酸含量(μ mol/g 鮮重)=[C 標(biāo)準(zhǔn)管×(Δ A 測(cè)定管-Δ A 空白管)÷(Δ A 標(biāo)準(zhǔn)管-Δ A 空白 管) ×V 樣]÷(W×V 樣÷V 樣總)=10×(Δ A 測(cè)定管-Δ A 空白管)÷(Δ A 標(biāo)準(zhǔn)管-Δ A 空白 管)÷W

　　C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)液濃度，10μ mol/mL; V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積：0.3mL;V 樣總：加 入提取液體積：1mL;Cpr：樣品蛋白濃度，mg/mL;W：樣本質(zhì)量，g。

　　注意事項(xiàng)：

　　低檢測(cè)限為10nmol/mg prot或1μ mol/g鮮重。

　　粒體檸檬酸( MCA)含量試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營(yíng)宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。