PCR產(chǎn)物的電泳檢測(cè)時(shí)間，一般為48h以內(nèi)，有些最-好于當(dāng)日進(jìn)行檢查，大于48h后帶型不規(guī)則甚至消失。

　　但有時(shí)仍會(huì)與到這樣那樣的問(wèn)題，影響檢測(cè)結(jié)果的判斷，具體歸類為以下常見(jiàn)的4點(diǎn)，描述如下：

　　問(wèn)題一：無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物

　　現(xiàn)象：正對(duì)照有條帶，而樣品則無(wú)。

　　原因：

　　1、模板:含有抑制物，含量低。

　　2、Buffer對(duì)樣品不合適。

　　3、引物設(shè)計(jì)不當(dāng)或者發(fā)生降解。

　　4、反應(yīng)條件：退火溫度太高，延伸時(shí)間太短。

　　對(duì)策：

　　1、純化模板或者使用試劑盒提取模板DNA或加大模板的用量。

　　2、更換Buffer或調(diào)整濃度。

　　3、重新設(shè)計(jì)引物(避免鏈間二聚體和鏈內(nèi)二級(jí)結(jié)構(gòu))或者換一管新引物。

　　4、降低退火溫度、延長(zhǎng)延伸時(shí)間。

　　問(wèn)題二：非特異性擴(kuò)增

　　現(xiàn)象：條帶與預(yù)計(jì)的大小不一致或者非特異性擴(kuò)增帶。

　　原因：

　　1、引物特異性差。

　　2、模板或引物濃度過(guò)高。

　　3、酶量過(guò)多。

　　4、Mg2+濃度偏高。

　　5、退火溫度偏低。

　　6、循環(huán)次數(shù)過(guò)多。

　　對(duì)策：

　　1、重新設(shè)計(jì)引物或者使用巢式PCR。

　　2、適當(dāng)降低模板或引物濃度。

　　3、適當(dāng)減少酶量。

　　4、降低鎂離子濃度。

　　5、適當(dāng)提高退火溫度或使用二階段溫度法。

　　6、減少循環(huán)次數(shù)。

　　問(wèn)題三：拖尾

　　現(xiàn)象：產(chǎn)物在凝膠上呈Smear狀態(tài)。

　　原因：

　　1、模板不純。

　　2、Buffer不合適。

　　3、退火溫度偏低。

　　4、酶量過(guò)多。

　　5、dNTP、Mg 2+濃度偏高。

　　6、循環(huán)次數(shù)過(guò)多。

　　對(duì)策：

　　1、純化模板。

　　2、更換Buffer。

　　3、適當(dāng)提高退火溫度。

　　4、適量用酶。

　　5、適當(dāng)降低dNTP和鎂離子的濃度。

　　6、減少循環(huán)次數(shù)。

　　問(wèn)題四：假陽(yáng)性

　　現(xiàn)象：空白對(duì)照出現(xiàn)目的擴(kuò)增產(chǎn)物。

　　原因：

　　靶序列或擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染。

　　對(duì)策：

　　1、操作時(shí)應(yīng)小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或?yàn)R出離心管外。

　　2、除酶及不能耐高溫的物質(zhì)外，所有試劑或器材均應(yīng)高壓消毒。所用離心管及加樣槍頭等均應(yīng)一次性使用。

　　3、各種試劑最-好先進(jìn)行分裝，然后低溫貯存。

　　PCR 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營(yíng)宗旨;牢固樹(shù)立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，不斷開(kāi)發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。