【古朵生物】ELISA試劑盒方法總結(jié)及實(shí)驗(yàn)小妙招

　　(一)間接法

　　1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜;

　　2.次日洗滌3次;

　　3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌;

　　4.(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml;

　　5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌;

　　6.’*后一遍用DDW洗滌。

　　其余步驟同“雙抗體夾心法"的4、5、6。

　　(二)雙抗體夾心法

　　1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗滌，下同)。

　　2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。

　　3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。

　　4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

　　5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

　　6. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。

　　ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)小妙招

　　常有剛剛接觸ELISA實(shí)驗(yàn)的新手說(shuō)操作復(fù)雜，步驟化很多，不易實(shí)驗(yàn)。其實(shí)當(dāng)我們掌握了其中的技巧與注意避免之后就會(huì)簡(jiǎn)單很多。我公司高手分析出操作要點(diǎn)提示，這些個(gè)實(shí)驗(yàn)技巧得記牢：

　　1. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

　　2. 所有液體組分使用前充分搖勻。

　　3. 實(shí)驗(yàn)前，產(chǎn)品應(yīng)保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶溶解后再使用。

　　實(shí)驗(yàn)記錄

　　1.所有實(shí)驗(yàn)的原始資料均應(yīng)存檔;

　　2.所有的記錄均應(yīng)規(guī)范登記在冊(cè);

　　3.原始登記表應(yīng)記錄試劑來(lái)源、批號(hào);

　　4.質(zhì)控血清的來(lái)源及測(cè)定值并注明是否在控;

　　5.簽上實(shí)驗(yàn)者姓名及審核者姓名。

　　評(píng)價(jià)的方法

　　1.發(fā)質(zhì)控物進(jìn)行調(diào)查，這是目前國(guó)內(nèi)外常見的形式，采用定期發(fā)放質(zhì)控物至各實(shí)驗(yàn)室，各實(shí)驗(yàn)室在規(guī)定的日期進(jìn)行檢驗(yàn)，并將結(jié)果報(bào)至組織者(部、省臨檢中心)。組織者通過統(tǒng)計(jì)分析，再將評(píng)價(jià)結(jié)果寄回實(shí)驗(yàn)室，使其了解工作質(zhì)量，發(fā)現(xiàn)問題，提高質(zhì)量。其缺點(diǎn)為由于各實(shí)驗(yàn)室吃小灶或互相打電話修改結(jié)果而達(dá)不到真正評(píng)價(jià)作用。

　　2.現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查，事先不通知，臨時(shí)派出人員到各實(shí)驗(yàn)室，規(guī)定采用常規(guī)方法，檢測(cè)一組標(biāo)本，進(jìn)行評(píng)價(jià)。這種方法可以解決實(shí)際問題，進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)，組織者常因人力、物力的原因而不能經(jīng)常性進(jìn)行。

　　ELISA試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營(yíng)宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。