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當(dāng)前位置:上海古朵生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>古朵生物| 免疫組化的二抗還有區(qū)別的么!
免疫組化大家基本上都做過(guò),你知道有二抗,也應(yīng)該知道免疫組化的原理就是一抗結(jié)合到目標(biāo)蛋白,再有二抗來(lái)進(jìn)行信號(hào)放大,大概是這樣:
但是你知道二抗的信號(hào)放大實(shí)際上有多種方法……這就需要你進(jìn)行二抗標(biāo)記方法的選擇,二抗標(biāo)記方法是直接法:
就是直接在二抗上標(biāo)記酶,比如HRP,來(lái)進(jìn)行顯色,這樣的二抗實(shí)際上很便宜,但是缺點(diǎn)就是靈敏度低,好多低豐度的蛋白,結(jié)合不上,免疫組化染出來(lái)的效果就不太好。
第二種方法,叫做PAP,比如二抗標(biāo)記了HRP,他們就在孵育二抗后,再孵育一種能結(jié)合HRP的一抗,就像這樣:
這種方法靈敏度是上去了,但是非特異性增高了,于是被主流淘汰了。
第三種方法被稱為ABC法或者SABC法,主要是在二抗上標(biāo)記生物su,孵育二抗后,加入親和素以及標(biāo)記了HRP的生物su,以這樣的聚合方式,來(lái)進(jìn)行信號(hào)的放大作用:
這種方法的優(yōu)點(diǎn)是能夠成倍提高靈敏度,但同時(shí)也會(huì)提高非特異性,于是就產(chǎn)生了第四種方法,LSAB法標(biāo)記的二抗:
這種方法,直接在親和素上加上HRP標(biāo)記,靈敏度也很高,同時(shí)降低了SABC法的非特異性。而且,LSAB法在實(shí)驗(yàn)的時(shí)一般孵育時(shí)間短(通常就10分鐘)。
但SABC法和LSAB法在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中會(huì)需要進(jìn)行內(nèi)源生物su封閉,會(huì)麻煩一些。為了省去麻煩,就產(chǎn)生了第五種標(biāo)記方法,也就是Polymer法,就是在二抗上標(biāo)記聚合的HRP:
這樣二抗的信號(hào)就得到了放大,靈敏度也提高了,但Polymer法、SABC法、LSAB法,都不能用于定量實(shí)驗(yàn),只能用在IHC上。
那免疫熒光呢?免疫熒光主流是采用直接法、LSAB法,以及直接標(biāo)記或者LSAB標(biāo)記的三抗來(lái)進(jìn)行信號(hào)放大的。總結(jié)一下,就是直接法的二抗便宜但是靈敏度差;PAP法基本已經(jīng)淘汰,LSAB和SABC法的靈敏度高,但是貴,步驟多;Polymer法靈敏度高,步驟簡(jiǎn)單,但是貴。
二抗 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品,勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司,產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國(guó)家和地區(qū),我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營(yíng)宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向,不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品,提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。上海古朵生物公司中“古朵"取自good的音譯,寓意是質(zhì)量好,品牌好,服務(wù)好!歡迎新老客戶洽談!
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