古朵跟你詳談ELISA夾心法中抗體質(zhì)量的重要性

　　理論上運(yùn)用*挑選的親和純化抗體可得到高特異性，高敏感度的免疫測定。但是，由于經(jīng)濟(jì)原因或是缺乏適宜的試劑，使得許多工作者采用低純度的制品，這種試劑一般含有與試驗中其它成分起交叉反響的抗體?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)在用抗人IgG抗血清的抗體時，抗體中含有不需要的抗體交叉反響。但當(dāng)運(yùn)用親和純的抗血清時，交叉反響不明顯。

　　研討任何ELISA系統(tǒng)，為了控制不需要的交叉反響，就要不吝運(yùn)用親和純試劑。運(yùn)用抗IgG血清抗體作為包被抗體，有時本底確實很低，但它的敏感度比僅運(yùn)用親和純制品要低50-100倍。在高敏感度的試驗中使用關(guān)閉試劑是很重要的。zui終挑選非親和純抗IgG血清抗體是根據(jù)這樣設(shè)想：包被抗體或是結(jié)合的人IgG(抗原)與指示抗體有交叉反響，則過量的與指示抗體同種動物的血清，就可以關(guān)閉與酶標(biāo)抗體的不要的結(jié)合。但是人血清白蛋白中含有少數(shù)的IgA和IgG會干擾檢測。人血清白蛋白只適用于IgE的測定。同樣，不能用牛血清白蛋白。由于其間含有微量的牛IgG。

　　抗血清抗體與親和純抗體對ELISA夾心法成果的影響可從下面試驗看出：

　　試驗A：包被抗體為粗制的綿羊抗人IgG抗體，指示抗體(檢抗)為粗制山羊抗人IgG抗體

　　試驗B：包被抗體為親和純的綿羊抗人IgG抗體，指示抗體(檢抗)為粗制山羊抗人IgG抗體

　　試驗C：包被抗體為粗制的綿羊抗人IgG抗體，指示抗體為親和純的山羊抗人IgG抗體

　　試驗D：包被抗體和指示抗體都是親和純的兔抗人IgG抗體。

　　試驗中運(yùn)用5%血清(與指示抗體同物種來歷)進(jìn)行關(guān)閉，其他夾心法ELISA步驟相同。

　　成果顯現(xiàn)，當(dāng)粗制的抗IgG血清抗體被用在夾心法的兩頭(如試驗a曲線)時，本底很高且曲線坡度不明顯。雖然能成功使用此抗體類型，但問題是一種抗體結(jié)合另一種抗體。可能發(fā)生了山羊指示抗體結(jié)合了綿羊包被抗體，由于稀釋液中的山羊血清過剩也不能下降本底值。當(dāng)使用親和純化的包被抗體時(如試驗b曲線)，本底恰當(dāng)下降而且形成了規(guī)范曲線。但是，大多數(shù)工作者認(rèn)為本底仍偏高，工作范圍有限(2-60ng/ml)。當(dāng)親和純的指示抗體與粗制包被抗體聯(lián)合運(yùn)用時(如試驗c曲線)，本底大大較低，但敏感度約為100-200ng/ml，再者工作范圍仍受限。當(dāng)*運(yùn)用親和純的抗體時(如試驗d曲線)，本底低，敏感度大大改進(jìn)且工作范圍廣(2-500ng/ml)。

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