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蛋白提取操作步驟與儲(chǔ)存
避免蛋白降解:
總體規(guī)則:蛋白酶普遍存在,在提取蛋白質(zhì)的步驟中,早些抑制,經(jīng)常抑制
分裝蛋白溶液,儲(chǔ)存于不同的溫度和不同的緩沖液中,測(cè)蛋白活性,找出最適儲(chǔ)存條件。
冷藏,并加入穩(wěn)定劑。這些穩(wěn)定劑一般都能充分保持蛋白的生物學(xué)活性。
將蛋白溶液儲(chǔ)于50%(V/V)的甘油或懸于硫酸銨(3.2M)中,避免凍存
冰結(jié)晶會(huì)造成物理剪切及蛋白變性。
避免酶的反復(fù)凍融,如果酶需要凍存,分裝成小管后凍存。
蛋白質(zhì)的儲(chǔ)存:
蛋白樣品在液氮中速凍,拿出后加入10-20%的甘油,長(zhǎng)期儲(chǔ)存
整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,都要將蛋白樣品置于冰上
從母管中吸取不同的蛋白時(shí),都要用新鮮的槍頭
不要將未用的溶液倒回母管
戴手套操作,避免蛋白交叉污染,或是蛋白酶的污染
避免劇烈的震蕩,避免溶液中混入蛋白變性劑
實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中應(yīng)避免灰塵進(jìn)入,灰塵包含60%的肌氨酸
操作過(guò)程中:
操作時(shí)總是小體積小量的操作,避免污染,并且動(dòng)作要快
a:此類蛋白酶在活性中心包含絲氨suan和組氨suan。
b:此類蛋白酶在活性中心包含半胱氨suan(巰基,-SH-)。
c:此類蛋白酶在活性中心包含金屬離子(如:n2+,Ca2+,Mn2+)。
d:此類蛋白酶在活性中心包含天冬氨酸族。
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