質(zhì)粒(Plasmid)與載體(Vector)的區(qū)別

　　一、載體與質(zhì)粒的區(qū)別

　　1.載體(Vector)的概念

　　把一個(gè)目的基因通過(guò)基因工程手段送到生物細(xì)胞(受體細(xì)胞)，需要運(yùn)載工具(交通工具)攜帶外源基因進(jìn)入受體細(xì)胞，這種運(yùn)載工具就叫做載體(vector)。

　　基因工程上所用的載體是一類能自我復(fù)制的DNA分子，其中的一段DNA被切除而不影響其復(fù)制，可用以置換或插入外源(目的) DNA而將目的DNA帶入宿主細(xì)胞。常用的載體有質(zhì)粒、噬菌體、病毒等。

　　【古朵生物】載體的功能及特征：

　　運(yùn)送外源基因高效轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞

　　為外源基因提供復(fù)制能力或整合能力

　　為外源基因的擴(kuò)增或表達(dá)提供必要的條件

　　載體應(yīng)具備的條件：

　　具有針對(duì)受體細(xì)胞的親緣性或親和性(可轉(zhuǎn)移性)

　　具有與特定受體細(xì)胞相適應(yīng)的復(fù)制位點(diǎn)或整合位點(diǎn)

　　具有較高的外源DNA的載裝能力

　　具有多具有合適的篩選標(biāo)記

　　種單一的核酸內(nèi)切酶識(shí)別切割位點(diǎn)

　　2.質(zhì)粒(Plasmid)的概念

　　質(zhì)粒是生物細(xì)胞內(nèi)固有的、能獨(dú)立于寄主染色體而自主復(fù)制、并被穩(wěn)定遺傳的一類核酸分子。質(zhì)粒常見于原核細(xì)菌和真菌中，絕大多數(shù)的質(zhì)粒是DNA型的，少部分為RNA型。天然DNA質(zhì)粒大都具有共價(jià)、封閉、環(huán)狀的分子結(jié)構(gòu)，其分子量范圍：1-300 kb。細(xì)菌質(zhì)粒是基因工程中常用的載體。

　　古朵生物詳述質(zhì)粒的基本特征：

　　質(zhì)粒的自主復(fù)制性：質(zhì)粒能利用寄主細(xì)胞的DNA復(fù)制系統(tǒng)進(jìn)行自主復(fù)制，其DNA上的復(fù)制子結(jié)構(gòu)決定了質(zhì)粒與寄主的對(duì)應(yīng)關(guān)系，并根據(jù)在每個(gè)細(xì)胞中的分子數(shù)(拷貝數(shù))多寡，質(zhì)?？煞譃閮纱髲?fù)制類型：

　　嚴(yán)緊型復(fù)制控制的質(zhì)粒 1 - 3 拷貝

　　松弛型復(fù)制控制的質(zhì)粒 10 - 60 拷貝

　　質(zhì)粒的不相容性：任何兩種含有相似復(fù)制子結(jié)構(gòu)的不同質(zhì)粒，不能同時(shí)存在于一個(gè)細(xì)胞中，這種現(xiàn)象稱為質(zhì)粒的不相容性，不相容性的質(zhì)粒組成不相容性群。以大腸桿菌的質(zhì)粒為例：

　　ColE1、pMB1 擁有相似的復(fù)制子結(jié)構(gòu)，彼此不相容。

　　pSC101、F、RP4 擁有相似的復(fù)制子結(jié)構(gòu)，彼此不相容。

　　p15A及其衍生質(zhì)粒擁有相似的復(fù)制子結(jié)構(gòu)，彼此不相容。

　　質(zhì)粒的可轉(zhuǎn)移性：革蘭氏陰性菌的質(zhì)?？煞殖蓛纱箢悾?/p>

　　接合型質(zhì)?！茉谔烊粭l件下自發(fā)地從一個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到另一個(gè)細(xì)胞(接合作用)，如F、Col、R質(zhì)粒等。

　　非接合型質(zhì)粒——不能在天然條件下獨(dú)立地發(fā)生接合作用如Col、R的其它成員。值得注意的是，某些非接合型質(zhì)粒(ColE1)在接合型質(zhì)粒的存在和協(xié)助下，也能發(fā)生DNA轉(zhuǎn)移，這個(gè)過(guò)程由 bom 和mob 基因決定攜帶特殊的遺傳標(biāo)記：野生型的質(zhì)粒DNA上往往攜帶一個(gè)或多個(gè)遺傳標(biāo)記基因，這使得寄主生物產(chǎn)生正常生長(zhǎng)非必需的附加性狀，包括：

　　物質(zhì)抗性：抗生素、重金屬離子、毒性陰離子、有機(jī)物等。

　　物質(zhì)合成：抗生素、細(xì)菌毒素、有機(jī)堿等。

　　這些標(biāo)記基因?qū)NA重組分子的篩選具有重要意義。

　　二、質(zhì)粒載體的分類

　　天然存在的野生型質(zhì)粒由于分子量大、拷貝數(shù)低、單一酶切位點(diǎn)少、遺傳標(biāo)記不理想等缺陷，不能滿足克隆載體的要求，因此往往需要以多種野生型質(zhì)粒為基礎(chǔ)進(jìn)行人工構(gòu)建。

　　質(zhì)粒載體按功能分：

　　克隆載體—都有一個(gè)松弛的復(fù)制子，能帶動(dòng)外源基因，在宿主細(xì)胞中復(fù)制擴(kuò)增。它是用來(lái)克隆和擴(kuò)增DNA片段(基因)的載體。

　　表達(dá)載體—具有克隆載體的基本元件(ori,Ampr,Mcs等)還具有轉(zhuǎn)錄/翻譯所必需的DNA順序的載體。

　　古朵生物詳述質(zhì)粒載體按進(jìn)入受體細(xì)胞類型分：

　　原核載體

　　真核載體

　　穿梭載體(sbuttle vector)指在兩種宿主生物體內(nèi)復(fù)制的載體分子，因而可以運(yùn)載目的基因(穿梭往返兩種生物之間)。穿梭質(zhì)粒含原核和真核生物2個(gè)復(fù)制子，以確保兩類細(xì)胞中都能擴(kuò)增。

　　質(zhì)粒載體按功能分：

　　高拷貝質(zhì)粒：突變拷貝數(shù)控制基因 拷貝數(shù)1000-3000擴(kuò)增基因

　　低拷貝質(zhì)粒：來(lái)自pSC101 拷貝數(shù)小于10 表達(dá)某些毒性基因

　　溫敏質(zhì)粒：在不同溫度下表現(xiàn)出拷貝數(shù)、整合等不同性質(zhì)

　　測(cè)序質(zhì)粒：含有測(cè)序通用引物互補(bǔ)序列和多酶接頭polylinker

　　整合質(zhì)粒：裝有整合促進(jìn)基因及位點(diǎn) 便于外源基因的整合

　　探針質(zhì)粒：裝有報(bào)告基因 便于啟動(dòng)子等元件的克隆篩選　　?

　　【古朵生物】質(zhì)粒(Plasmid)與載體(Vector)的區(qū)別 酶免疫組化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)及免疫熒光方法上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營(yíng)宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。