古朵免疫熒光技術(shù)之染色方法您清楚嗎

　　一、制片

　　選無自發(fā)性熒光的石英玻片或普通優(yōu)質(zhì)玻片，洗凈后浸泡于無水乙醇和乙mi等量混合液中。用時(shí)取出用綢布擦凈。將待檢樣品如組織塊剪成適當(dāng)大小印壓于玻片上。也可采用冰凍切片或石蠟切片樣品。

　　二、固定

　　除研究細(xì)胞表面抗原或不穩(wěn)定抗原可不固定外，一般均應(yīng)固定。

　　固定的作用有三：

　　1. 防止標(biāo)本從玻片上脫落。

　　2. 除去防礙抗原-抗體結(jié)合的類脂，使抗原抗體結(jié)合物易于獲得良好的染色結(jié)果。

　　3. 固定的標(biāo)本易于保存，如組織切片固定后在-20℃下可保存一年而不改變其染色特性。

　　標(biāo)本的固定原則是：

　　1. 不能損傷細(xì)胞內(nèi)的抗原。

　　2. 不能凝集蛋白質(zhì)。

　　3. 不能損傷細(xì)胞形態(tài)。

　　4. 固定后應(yīng)保持細(xì)胞膜的通透性，以允許抗體進(jìn)入與抗原結(jié)合。

　　三、水洗

　　固定后以冷的0.01 Mol/L pH7.4PBS液浸泡沖洗，最后以蒸餾水沖洗，防止自發(fā)性熒光。

　　四、染色

　　染色分直接染色法與間接染色法。

　　1. 材料與試劑

　　(1)熒光抗體，稀釋至應(yīng)用濃度。

　　(2)0.01 Mol/L pH7.4PBS液

　　(3)9份優(yōu)質(zhì)甘油加1份pH7.4PBS液即為甘油緩沖液。甘油有減少非特異性熒光的作用。

　　(4)帶蓋方盤

　　2. 直接染色法

　　(1)將固定好的玻片置于濕盤中，滴加熒光抗體染色液，以覆蓋為度，加蓋，37℃感做30 min~45min。

　　(2)PBS沖洗3次，每次沖洗3 min，即3×3沖洗。

　　(3)蒸餾水沖洗。

　　(4)滴甘油緩沖液一滴，封片，熒光顯微鏡檢查。

　　3. 間接染色法

　　(1) 檢查抗原：

　?、偃」潭?biāo)本，加已知的免疫血清，37℃孵育30 min。

　?、谝訮BS液3×3沖洗。

　?、墼偌訜晒鈽?biāo)記的抗抗體，37℃孵育30 min。

　?、躊BS 3×3沖洗。

　　⑤H2O沖洗，涼干。

　?、藜痈视途彌_液，封片、鏡檢。

　　(2)檢查抗體：

　?、倜庖吆髣?dòng)物的淋巴組織涂片，自然干燥，甲醇固定。

　?、诘渭酉鄳?yīng)抗原液(按1：100~1：500稀釋)，37℃孵育30 min。

　?、跴BS液3×3沖洗。

　?、芗訜晒饪贵w，37℃孵育30 min。

　?、軵BS液3×3沖洗。

　?、匏矗瑳龈?。

　?、?strong>加甘油緩沖液，封片、鏡檢。

　　免疫熒光技術(shù)之染色方法 古朵 上海古朵生物科技有限公司，由具有資深行業(yè)背景和豐富市場(chǎng)經(jīng)驗(yàn)的專業(yè)人士組成，致力于為生命科學(xué)研究領(lǐng)域提供產(chǎn)品，為廣大科研工作者提供服務(wù)。既能滿足研發(fā)類客戶對(duì)產(chǎn)品種類、包裝、純度的特殊要求，也能滿足生產(chǎn)型企業(yè)從小試、中試到規(guī)?；a(chǎn)各個(gè)階段的綜合需求。產(chǎn)品涵蓋有機(jī)試劑、無機(jī)試劑和生化試劑，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、天然植物提取物及中藥標(biāo)準(zhǔn)品，核酸、酶、緩沖劑、顯色底物，醫(yī)藥中間體、原料藥、催化劑、高純?nèi)軇?、特種高分子材料及實(shí)驗(yàn)室常用耗材。品種類超過2萬種，廣泛應(yīng)用于細(xì)胞藥理、藥劑、分子生物學(xué)等科研領(lǐng)域。