做蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)時(shí)，通常用SDS-PAGE電泳檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)情況，MARK是其中非常重要的參照物，使用Mark會(huì)遇到以下幾種情況：
條帶模糊：
電壓過(guò)高或電泳時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，產(chǎn)熱過(guò)多導(dǎo)致電泳緩沖液溫度升高。建議參照Trans產(chǎn)品使用說(shuō)明書(shū)。
電泳緩沖液陳舊，建議使用新鮮的電泳緩沖液，為了獲得理想的結(jié)果建議在使用前將緩沖液預(yù)冷。
分離膠的濃度偏低，建議使用合適的膠濃度。
SDS-PAGE凝膠放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，建議使用新配制的凝膠電泳。
帶型不整齊：
建議點(diǎn)樣時(shí)將蛋白marker 放在泳道中間。如在凝膠兩側(cè)泳道，由于邊緣效應(yīng)，離子強(qiáng)度不勻等，均會(huì)導(dǎo)致帶型變寬或彎曲。
凝膠配制不勻，凝膠內(nèi)存有氣泡，或點(diǎn)樣孔中有細(xì)碎的殘膠。
樣品滯留點(diǎn)樣孔：
濃縮膠配制有問(wèn)題或膠孔堵塞。
Marker蛋白表達(dá)檢測(cè)
免疫熒光技術(shù)(Immunofluorescence technique )又稱(chēng)熒光抗體技術(shù)，是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種。它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來(lái)的一項(xiàng)技術(shù)。很早以來(lái)就有一些學(xué)者試圖將抗體分子與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合，利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行組織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。
技術(shù)原理
免疫熒光技術(shù)是根據(jù)抗原-抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光基團(tuán)，再用這種熒光抗體(或抗原)作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原(或抗體)。利用熒光顯微鏡可以看見(jiàn)熒光所在抗體的性質(zhì)和定位。
