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上海古朵生物科技有限公司

提取的基因組DNA有降解咋辦？

時間：2021-7-27閱讀：1006
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　　DNA降解的因素：
 
　　外界物理因素:溫度、濕度
 
　　化學(xué)因素：pH值、水解反應(yīng)、氧化反應(yīng)
 
　　生物因素：酶解及微生物侵染等作用。
 
　　這些因素都直接與DNA的構(gòu)型、分子組成有關(guān)
 
　　DNA分子結(jié)構(gòu)：
 
　　DNA是由許多脫氧核苷酸殘基按一定順序彼此用3’，5’-磷酸二酯鍵相連構(gòu)成的長鏈。
 
　　[形成鏈的作用力——磷酸二脂鍵，易被水解]；
 
　　大多數(shù)DNA含有兩條這樣的長鏈
 
　　[兩條鏈間以氫鍵相連接——氫鍵在強(qiáng)電解質(zhì)環(huán)境，尤其在高酸度環(huán)境內(nèi)易開鍵]
 
　　也有的DNA為單鏈，如大腸桿菌噬菌體φX174、G4、M13等。有的DNA為環(huán)形，有的DNA為線形。
 
　　選取的材料不新鮮或反復(fù)凍融，采集材料后未及時處理或未低溫保存：陳舊血液或不新鮮的材料中，細(xì)胞凋亡導(dǎo)致DNA降解，或者低溫保存的樣品經(jīng)反復(fù)凍融導(dǎo)致細(xì)胞破碎，內(nèi)源性核酸酶降解DNA，因此應(yīng)該選用新鮮的材料樣品，不能及時處理則低溫保存，運(yùn)輸過程中應(yīng)該使用干冰：
 
　　1 ) 未能有效的抑制內(nèi)源性核酸酶的作用：
 
　　某些DNase含量豐富的動植物組織樣品應(yīng)在液氮中研磨或勻漿，研磨過稱中隨時補(bǔ)充液氮，并在樣品未*解凍之前加入含有抑制核酸酶作用的裂解液。
 
　　2 ) 操作過于劇烈導(dǎo)致 DNA 被機(jī)械打斷：
 
　　預(yù)處理的樣品應(yīng)該加入細(xì)胞裂解以后，所有操作應(yīng)該盡量柔和，避免劇烈振蕩。

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