在生物科研這個領(lǐng)域里，很多小伙伴都會接觸到質(zhì)粒這個小東西，而當(dāng)你費盡千辛萬苦后找到這個小東西的圖譜時，你就會發(fā)現(xiàn)圖譜上有很多亂七八糟的箭頭，還有很多英文的序列，比如像什么ORI啊，Amp啊等等，那這些東西究竟是什么意思呢，今天小編就在這里為大家詳細解答一番。
首先要為大家介紹下質(zhì)粒圖譜包含的四大要素
1.復(fù)制起點：控制著質(zhì)粒的復(fù)制，并決定了質(zhì)粒的宿主和拷貝數(shù)
2.篩選標記：多為抗性基因，以便加以檢測篩選
3.多克隆位點：外源基因的插入位點
4.其他元件：如轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件、翻譯表達元件和蛋白標簽等
以下就用大家常用的pcDNA3.1(+)表達載體作為案例
第一步：了解質(zhì)粒圖譜中的復(fù)制起點
如上圖譜中的ori表示質(zhì)粒的復(fù)制起點。質(zhì)粒的復(fù)制起點決定了質(zhì)粒的宿主及質(zhì)粒的拷貝數(shù)相關(guān)。若圖譜上只有一個ori，表示質(zhì)粒是原核克隆及表達質(zhì)粒。而圖譜上有兩個ori，則表示該質(zhì)粒是穿梭質(zhì)粒，既可以在原核也可以在真核中復(fù)制。
第二步：了解質(zhì)粒圖譜中的篩選標記
圖譜中的AmpR、KanR等表示質(zhì)粒載體中的篩選標簽，多為抗生素抗性基因，方便后續(xù)通過抗生素篩選陽性克隆。只存在單抗性的質(zhì)粒多為原核克隆載體和原核表達載體。而存在兩種或以上的抗性的多為穿梭質(zhì)粒。
第三步：了解質(zhì)粒圖譜中的多克隆位點
圖譜中的MCS區(qū)或者許多內(nèi)切酶集中的部分，就是質(zhì)粒的多克隆位點。多克隆位點為一系列限制性內(nèi)切酶酶切位點，是外源DNA的插入位點，一般可通過酶切后連接的方式將外源DNA插入質(zhì)粒。多克隆位點一般位于轉(zhuǎn)錄啟動和轉(zhuǎn)錄終止信號之間。
第四步：了解質(zhì)粒圖譜中其它元件
質(zhì)粒載體中除復(fù)制起始位點、篩選標記、多克隆位點外，還具有其他一些表達或調(diào)控元件，如轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件、翻譯調(diào)控元件和融合表達標簽蛋白等。比如：
蛋白純化標簽蛋白：His-Tag，GST-tag等
蛋白檢測標簽蛋白：Myc-Tag，F(xiàn)lag-Tag，HA-Taq等
熒光蛋白表達標簽：GFP，mCherry等
