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當前位置:上海古朵生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>細胞爬片、甩片的制備方法
(一)細胞爬片的制備
(1)如果使用載玻片或蓋玻片,必須在使用之前滅菌。可以一次滅菌并貯存在無菌狀態(tài)下。如果使用少量的蓋玻片,用金屬鑷子夾住蓋玻片,在70%乙醇中浸泡,然后在火焰上烤干。要輕輕地鑷取,以防破裂。為了方便起見,可以將蓋玻片浸泡于70%的乙醇中,使用時放在火焰上處理。如果使用的蓋玻片或載玻片數(shù)量較多,可以將它們放于專用的金屬支架上,然后高壓消毒。如果需要的數(shù)量更大,則可將其放在耐熱的容器中,干烤2小時。
(2)在無菌狀態(tài)下,把干燥的玻片放于適當?shù)呐囵B(yǎng)皿中。蓋玻片可以用金屬鑷子鑷取,圓形蓋玻片可以放在24孔培養(yǎng)板的孔中,直徑90mm的培養(yǎng)皿能夠放入10-15張蓋玻片,或者放入一張標準的載玻片。
(3)將懸浮的細胞放入組織培養(yǎng)皿中,培養(yǎng)至少24小時,讓細胞貼附在玻片上。要想得到一個較好的結(jié)果,在加細胞時,密度應低,以防細胞密度過高。
(4)如果細胞數(shù)目有限,可把細胞懸液直接滴在玻片上,靜置4小時后再輕輕加入培養(yǎng)液。通過這種方式,大部分細胞將粘附于玻片上,然后再培養(yǎng)約24小時,使細胞適當擴增。此時,取出載玻片或蓋玻片可進行固定。
(二)細胞甩片的制備
(1)用PBS洗滌細胞(400×g離心5min),并重懸于PBS中。調(diào)整濃度至1×106 /ml~2×106 /ml;
(2)將載玻片固定于甩片機的轉(zhuǎn)頭上,然后加入0.1ml細胞懸液;
(3)迅速使離心力達到1200×g,離心5~10min; (4)使玻片上單層細胞在空氣中干燥15~20min。此時,細胞可進行固定。
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