1、原理：細(xì)胞在有絲分裂的過程中DNA會(huì)復(fù)制擴(kuò)增加倍，為原來的1-2倍。PI染色DNA后，通過檢測(cè)DNA的量來判斷細(xì)胞周期狀態(tài)。G1期細(xì)胞主要進(jìn)行RNA和蛋白的合成， DNA數(shù)目為n。S期DNA開始復(fù)制，直到復(fù)制結(jié)束進(jìn)入M期，DNA數(shù)目為n-2n。G2期主要是RNA和蛋白的合成,為M期做準(zhǔn)備 DNA數(shù)目為2n 。M期細(xì)胞分裂的過程，直到M結(jié)束細(xì)胞一分為二，DNA數(shù)目也是2n。從DNA的數(shù)目上，我們可以將細(xì)胞周期分為G0/G1期，S期，G2/M期.

2、細(xì)胞消化要理想，資料顯示最-好消化時(shí)加EDTA，充分使細(xì)胞消化成單個(gè)細(xì)胞，因?yàn)榧?xì)胞成團(tuán)會(huì)被流式細(xì)胞儀誤檢測(cè)成多倍體，從而使結(jié)果中G2/M期細(xì)胞比例增加。

3．細(xì)胞消化后不可吹打過度，減少細(xì)胞破碎；以后的吹打也要注意，尤其是固定后的細(xì)胞容易破碎。

3、細(xì)胞用PBS洗滌離心，轉(zhuǎn)速不超過1000r/min，有文獻(xiàn)用800r/min；可考慮在此過程中用300目的尼龍網(wǎng)過濾一遍細(xì)胞（有人主張用鋼網(wǎng)，以 減少細(xì)胞與尼龍網(wǎng)粘連的損失，本人覺得鋼網(wǎng)易損傷細(xì)胞，DNA外溢也會(huì)造成細(xì)胞粘連，所以在細(xì)胞數(shù)足夠的情況下，首-選尼龍網(wǎng)）。

4、離心后的固定，標(biāo)準(zhǔn)做法是將細(xì)胞懸液加入預(yù)冷70％酒精，而不是向細(xì)胞中加酒精，這樣是為了減少細(xì)胞聚集，這一點(diǎn)很重要，很多人都忽視了！

5、一般選擇4℃固定過夜，固定時(shí)間不要超過24小時(shí)。

6、加染液前的洗滌仍要注意離心轉(zhuǎn)速的問題。

7、關(guān)于PI染液的組成及配方，應(yīng)主要以文獻(xiàn)為主，PI（作用為DNA染色劑）的濃度從0.5μg/ml,20μg/ml，到50μg/ml都見報(bào)道。RNAs酶（由于PI也可染RNA，用RNA酶降解RNA，從而PI染色能精-準(zhǔn)的反應(yīng)DNA的含量。）一般濃度為50μg/ml，配方中的Triton-X-100（曲拉通）主要是通透細(xì)胞膜使PI能進(jìn)入細(xì)胞核。

8、檢測(cè)時(shí)細(xì)胞要達(dá)到1～2×10^6個(gè)細(xì)胞（實(shí)際檢測(cè)是1-5萬個(gè)細(xì)胞左右），為了既保持初始條件相同，又可收集到足夠的細(xì)胞，應(yīng)選用多孔培養(yǎng)板，在收集細(xì)胞時(shí)，濃度大、抑制強(qiáng)的組可多收集些孔，以保證檢測(cè)的細(xì)胞數(shù)量。如果細(xì)胞數(shù)量太低，技師就會(huì)選擇高速流（一般的檢測(cè)用低速流，誤差?。?，檢測(cè)的質(zhì)量就會(huì)大大下降，數(shù)據(jù)的說服力就下降了！
 

9、周期結(jié)果圖中各相峰高聳，各期分開清楚顯示較好的結(jié)果。