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當前位置:上海古朵生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>胎牛血清給細胞帶來的益處
胎牛血清是細胞培養(yǎng)中常用*的添加培養(yǎng)基。它營養(yǎng)豐富,大約含有三四百種不同成分,具有基礎(chǔ)培養(yǎng)基所不具備的營養(yǎng)因子。
它給細胞提供的益處主要有六個方面
1>提供細胞生長所需的天然激素或天然的生長因子。
2>提供天然的結(jié)合蛋白,能識別氨基酸、脂質(zhì)、金屬離子和激素等,能結(jié)合并調(diào)節(jié)它們的活性。已知清蛋白(albumin)即具有上述功能,并對細胞代謝、生物合成、增殖和存活具有潛在的影響。
又如胎牛血清中富含胎球蛋白(Fetuin),具有多個鈣離子結(jié)合位點,因而能調(diào)節(jié)和維持血清中的鈣離子濃度。
3>天然含有粘附蛋白等細胞外基質(zhì)成分,促進細胞的附著、鋪展。
4>提供解毒功能。這主要通過血清中的某些蛋白與有毒的金屬離子結(jié)合來完成的。如金屬硫蛋白,對多種重金屬有高度親和性,并可清除細胞生長環(huán)境中的氧自由基(·O),具有很強的抗氧化活性,可防止細胞衰老。
5>提供酸堿度緩沖的作用,以及維持滲透壓。
6>提供蛋白酶抑制劑,使細胞免受蛋白酶的損傷。因此在細胞消化時,常用含血清的培養(yǎng)液終止胰酶對細胞的作用。
由于胎牛血清幾乎是通用的生長添加物,適合動物、人和昆蟲細胞等許多類型細胞的培養(yǎng),因此使用血清不需要為每一類細胞優(yōu)化培養(yǎng)基,節(jié)省了大量時間和精力。
血清保存注意事項:
(1)需要長期保存的血清必須儲存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。
(2)熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已*解凍的血清。加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻。此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活。除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多,而且還會影響血清的質(zhì)量。補體參與反應(yīng)有:細胞毒作用, 平滑肌細胞收縮, 肥大細胞和血小板釋放組胺, 增強吞噬作用, 促進淋巴細胞和巨噬細胞發(fā)生化學趨化和活化。
(3)瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。
(4)一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接過濾血清。
(5)血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質(zhì)量??捎秒x心3000rpm, 5分鐘去除,也可不用處理。 顯微鏡下"小黑點":經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤認為血清受污染。一般情況下,此小黑點不會影響細胞生長,但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號的血清。
(6)切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會破會而影響血清質(zhì)量。
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