穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，即進(jìn)入細(xì)胞的質(zhì)粒整合入細(xì)胞基因組中，并能隨細(xì)胞分裂穩(wěn)定傳遞下去。這是相對瞬時轉(zhuǎn)染而言的。

    瞬時轉(zhuǎn)染的表達(dá)時間短暫，外源基因?qū)胝匣蚪M的幾率非常低，絕大部分以游離形式存在，不能隨細(xì)胞分裂而一同復(fù)制，導(dǎo)致后拷貝數(shù)被稀釋，無法達(dá)到持續(xù)表達(dá)外源基因的目的。一般用轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，多為瞬時轉(zhuǎn)染。

    一般如下情況需要構(gòu)建穩(wěn)定株

    1. 長期在目的細(xì)胞中研究基因功能，通過構(gòu)建穩(wěn)定株，可以大大降低頻繁轉(zhuǎn)染或者病毒包裝的成本，也極大方便實驗研究；

    2. 部分蛋白半衰期極長，瞬時 RNA 只能干擾表達(dá)，無法去除已經(jīng)表達(dá)的目的蛋白，通過構(gòu)建穩(wěn)定株可以實現(xiàn)更好的基因干擾效果；

    3. 瞬轉(zhuǎn)往往會引入*拷貝數(shù)的表達(dá)，導(dǎo)致因為人為因素造成實驗結(jié)果的不精確，構(gòu)建穩(wěn)定株可以幫助篩選拷貝數(shù)適量的細(xì)胞進(jìn)行實驗研究；

    4. 需要用誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)的，主要是一些致死基因或者是需要時空表達(dá)的；

    5. 需要用細(xì)胞做動物實驗的，比如裸鼠成瘤等，往往需要構(gòu)建成穩(wěn)轉(zhuǎn)株。

    構(gòu)建穩(wěn)定株的方法

    其實用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染、磷酸鈣轉(zhuǎn)染法等理論上是可以構(gòu)建穩(wěn)定株的，但這些方法整合入基因組的效率極低，很難成功。而慢病毒可以攜帶外源基因隨機(jī)整合進(jìn)基因組，效率很高，是建立穩(wěn)定株的-優(yōu)方式。



    構(gòu)建穩(wěn)定株的注意點

    穩(wěn)定株構(gòu)建是個長期過程，從質(zhì)粒構(gòu)建到慢病毒包裝，再到細(xì)胞感染及后期的篩選，每一步都至關(guān)重要，所以建立穩(wěn)轉(zhuǎn)株花個半年時間，也是常有的事，而且要承擔(dān)病毒包裝不成功，細(xì)胞感染效率低等風(fēng)險。