我們可能都有過這樣的經(jīng)歷：

    辛苦呵護的細胞，怎么也不愿意貼壁；

    貼壁了又很容易成塊或者成團掉下來；

    原本貼壁的細胞，復蘇后細胞不貼壁了；

    ........

遇到這樣的問題你都如何解決？這次我們就來聊聊，為啥你的細胞為這么矯情，不愿貼壁呢？

體外培養(yǎng)細胞貼壁與什么有關(guān)？

首先并不是所有的細胞在體外培養(yǎng)的情況下都會貼壁，但大部分來自實體組織器官的細胞都會貼壁。

貼壁的過程可能是這樣的：細胞首先分泌細胞外基質(zhì)，這種細胞外基質(zhì)黏附在支持物的表面（培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)皿的底面）。然后，細胞通過其表面表達的黏附因子與這些細胞外基質(zhì)結(jié)合。

所以細胞貼壁與否和細胞本身分泌細胞外基質(zhì)的能力以及細胞本身表達的黏附分子的數(shù)量有關(guān)，也與培養(yǎng)皿壁的表面結(jié)構(gòu)有關(guān)。

 

細胞為什么要貼壁？

細胞貼壁的過程使形態(tài)發(fā)生很大變化，細胞形態(tài)改變是細胞內(nèi)骨架（是真核細胞中的蛋白纖維網(wǎng)架體系，由微管、微絲及中間纖維組成的體系）本身和細胞外基質(zhì)共同作用的結(jié)果。

密度大于培養(yǎng)基的細胞（絕大部分細胞）會沉降在底面上，那么細胞要生存必定得改善這個環(huán)境，分泌細胞外基質(zhì)，改善底面的結(jié)構(gòu)，然后很自然就貼附在底面上了。

密度小于水的細胞，如脂肪細胞，漂浮在液面上，所以不可能貼在底面上，但是如果將培養(yǎng)液加滿，那么細胞能夠與培養(yǎng)瓶上面的壁接觸同樣可以貼壁。因此可以說，細胞貼壁是適應(yīng)環(huán)境的一種反應(yīng)。

細胞不貼壁，可能是這些原因？

    細胞的傳代zui重要的是胰酶處理時間：消化不夠細胞本身就是成團的；若胰酶處理太久，容易造成細胞膜蛋白損傷，使細胞貼壁不緊，顯微鏡下觀察立體感不強，嚴重的時候甚至會造成細胞死亡。

    缺少貼壁因子：血清中含有促貼壁因子，而無血清培養(yǎng)基工藝中由于缺少這種促貼壁因子，細胞的貼壁效果會下降很多。

    支原體或細菌的污染。

    培養(yǎng)液配置、儲存不當，如 pH 值過堿，Gln 量太少等原因。

    復蘇的細胞本身狀態(tài)不好，已經(jīng)老化，失去貼附性。

    接種細胞數(shù)目太少，無法分泌足夠的細胞外基質(zhì)。

    復蘇時處理速度太慢，復蘇過程不當。

如何促進貼壁效果？

1. 適度消化細胞：HepG- 2、A549、Hela、SGC- 7901 幾種癌細胞處理時間可適當放長，一般處理 5 - 6 min，C2C12、COS- 7、NIH- 3T3 比較容易脫落，2 min 足矣，P19Cl6 和 293 細胞貼壁不緊，可在 PBS 漂洗后，直接換新鮮培養(yǎng)基打散。

2. 用塑料瓶培養(yǎng)，如果是玻璃瓶, 那么可以用鼠尾膠原包被一下培養(yǎng)瓶，或者用鹽酸對培養(yǎng)瓶進行蝕刻，或者涂 Laminin/fibronectin/collagen/BSA，也可以幫助細胞貼附新的培養(yǎng)瓶，細胞不易貼壁，建議加多聚賴氨酸處理。

3. 正確配制消化液或培養(yǎng)液。

4. 使用合適的細胞外基質(zhì)或貼壁試劑。

5. 復蘇新的細胞，第一周用 20% 血清幫助細胞復原。

6. 傳代接種一定要鋪的均勻，避免細胞抱團生長。

7. 細胞傳代 24 小時之內(nèi)，不要晃動，以免影響貼壁。

8. 體內(nèi)上皮細胞生長在膠原構(gòu)成的基膜上，因此培養(yǎng)在有膠原的底物上有利于生長。人或小鼠表皮細胞培養(yǎng)，可以用γ射線照射后的 3T3 細胞為飼養(yǎng)層，另外降低 pH、Ca2 +含量和溫度，均有利于上皮細胞生長。