慢病毒不但可感染分裂或非分裂細(xì)胞，還可將外源基因有效地整合到宿主染色體上，從而實(shí)現(xiàn)持久表達(dá)，又很少引發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng)。被譽(yù)為「細(xì)胞實(shí)驗(yàn)shou選、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)*」工具病毒。

并且作為基因載體在治療各類遺傳性和后天性的人類疾病中倍受歡迎：從基礎(chǔ)研究發(fā)展到臨床階段，高濃度、高感染效率的慢病毒都是感染細(xì)胞表達(dá)（或沉默）目的基因的理想分子工具。

那么慢病毒在感染細(xì)胞中有什么優(yōu)良表現(xiàn)呢？

慢病毒感染細(xì)胞的步驟一般是這個(gè)樣子的，以「24 孔培養(yǎng)板、貼壁細(xì)胞」為例：

Day0: 接種細(xì)胞
每孔按 5×10⁴ 個(gè)待感染細(xì)胞鋪板，用含有 10% FBS 的 DMEM 培養(yǎng)基培養(yǎng);

Day1: 細(xì)胞感染
感染前，根據(jù)說明書用*培養(yǎng)基配置感染液，備用吸掉舊培養(yǎng)基，更換為感染液; 并參考細(xì)胞 MOI 值，計(jì)算病毒使用量，加入病毒進(jìn)行感染，混勻;

Day2 
病毒感染 8~16 h 后，換回常規(guī)培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng);

Day3~4: 確認(rèn)感染效果
感染 72 h 后，顯微鏡下觀察感染效果，如 EGFP、Cherry 的表達(dá)情況；

如果都這么簡單的話，那你真的是 too young too simple！ 

那么在慢病毒感染細(xì)胞過程中，到底會(huì)遇到哪些問題呢？此貼統(tǒng)統(tǒng)幫您搞定~~

難感染問題該如何解決？

對(duì)于一些較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，如原代細(xì)胞、干細(xì)胞、不分化的細(xì)胞等，可以通過添加病毒感染增強(qiáng)液來顯著提高轉(zhuǎn)染效率。

除了難感染外，感染效率低和加入慢病毒后，細(xì)胞死亡也是科研的又一攔路虎。
 

• 針對(duì)加入慢病毒后，細(xì)胞死亡很厲害，該如何處理？

這種情況是由于慢病毒對(duì)該細(xì)胞有一定的毒性作用，需要調(diào)整并降低感染的 MOI 值，并且在感染后 4 小時(shí)、8 小時(shí)、12 小時(shí)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行觀察，若發(fā)現(xiàn)細(xì)胞狀態(tài)變差時(shí)，則需要立刻對(duì)細(xì)胞進(jìn)行換液操作，使用新鮮的*培養(yǎng)液替換病毒感染培養(yǎng)液。
 

• 如何提高慢病毒對(duì)細(xì)胞的感染效率？

慢病毒對(duì)細(xì)胞的感染效率受多個(gè)因素影響，如細(xì)胞自身生長的狀態(tài)，細(xì)胞數(shù)量，細(xì)胞被慢病毒感染的難易程度等。因此保證細(xì)胞正常增殖，輪廓清晰，合適的細(xì)胞密度，選擇*的感染條件可以更好的保證感染效率。對(duì)于懸浮細(xì)胞，可采用離心感染方法，減少病毒感染時(shí)的體積，從而提高感染效率。如將細(xì)胞培養(yǎng)板密封后，用平角轉(zhuǎn)子離心機(jī) 1000 g 離心 1 h，再放回培養(yǎng)箱中正常培養(yǎng)。