熒光素酶

自然界中的熒光素酶：是自然界中能夠產(chǎn)生熒光的酶的系統(tǒng)，如發(fā)光真菌，發(fā)光海星，發(fā)光魚(yú)，發(fā)光節(jié)蟲(chóng)，發(fā)光甲蟲(chóng)等。

螢火蟲(chóng)熒光素酶：目前常用的螢火蟲(chóng)熒光素酶來(lái)源于北美螢火蟲(chóng)（Photinus pyralis）,是一個(gè)61KDa的單體酶，無(wú)需表達(dá)后修飾，直接具有*酶活性，反應(yīng)需要底物熒光素以及ATP、氧氣、鎂離子等。

海腎熒光素酶：來(lái)源于海腎（Renilla reniformis），是一個(gè)36KDa的單體酶，表達(dá)后無(wú)需修飾，即可具有*酶活，反應(yīng)只需要腔腸素和O2參與。

Gussia熒光素酶：來(lái)源于海洋橈腳類(lèi)生物Gaussia princeps，是一個(gè)19.9kDa單體酶，只有185個(gè)氨基酸，具有一個(gè)16aa 的分泌信號(hào)肽，可以被細(xì)胞分泌到細(xì)胞外，反應(yīng)只需要腔腸素和O2參與。

腔腸素/Coelenterazine

美國(guó)Goldbio品牌的兩種腔腸素，分別是天然腔腸素/Coelenterazine及其衍生物Coelenterazine 400a。

天然腔腸素/Coelenterazine：普 遍認(rèn)為是天然的腔腸熒光素，是海腎熒光素酶（Rluc）的作用底物，具有許多用途。可用于檢測(cè)活細(xì)胞中鈣離子濃度，基因報(bào)告分析，BRET（生物發(fā)光共振 能量轉(zhuǎn)移）研究，ELISA，HTS，組織或細(xì)胞中超氧陰離子和過(guò)亞硝酸鹽的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)，在460-470nm之間發(fā)射熒光。分子式：C26H21N3O3 分子量: 423.48 g/mol ，純度：95% ，保存：-15°C避光，保存在惰性氣體下。
 

腔腸素400a/ Coelenterazine 400a: 是BRET研究中海腎熒光素酶（Rluc）的首shou底物，此腔腸素衍生物在390 nm和400nm之間發(fā)藍(lán)色光，對(duì)GFP acceptor的光發(fā)射干擾小。分子式：C26H21N3O 分子量：: 391.48 g/mol ，純度：95%，保存：-15°C避光，保存在惰性氣體下。

此外，Nanolight 除了提供天然腔腸素/Coelenterazine和Coelenterazine 400a，還提供體內(nèi)實(shí)驗(yàn)用水溶性腔腸素，體外實(shí)驗(yàn)水溶性腔腸素，Coelenterazine h，Coelenterazine f，Coelenterazine e等。

還在為找不到水溶性腔腸素而煩惱嗎？還在為溶解腔腸素的溶劑對(duì)動(dòng)物的毒害而煩惱嗎？下面介紹的水溶性腔腸素，將解決您的煩惱！

體內(nèi)實(shí)驗(yàn)水溶性腔腸素/Water-soluble Coelenterazine (CTZ-SOL) for in vivo use：腔 腸素用于體內(nèi)成像研究時(shí)通常是結(jié)合其他醇類(lèi)溶解在丙二醇或甲醇中。大劑量的靜脈注射丙二醇在短時(shí)間內(nèi)即可產(chǎn)生毒性，包括高滲透壓，增加陰離子間隙代謝性酸 中毒（由于乳酸中毒），急性腎損傷，似敗血癥綜合癥。

而使用水溶性腔腸素可以避免此類(lèi)情況的發(fā)生，是制定的等滲透壓，容易由腎臟分泌。因此除了重復(fù)靜脈注 射，水溶性的腔腸素可以注入的濃度高達(dá)500µg/100µl ，在體內(nèi)的腔腸素水平達(dá)到很高，并產(chǎn)生較高的Gaussia熒光素酶信號(hào)。成分：天然腔腸素 +用于水溶的無(wú)毒添加劑。

采用體內(nèi)實(shí)驗(yàn)水溶性腔腸素優(yōu)點(diǎn)：

1.無(wú)毒、等滲透壓、無(wú)丙二醇、無(wú)酒精。

2.保質(zhì)期長(zhǎng)，密封在真空中。

3.在無(wú)菌水中快速溶解。

4.低粘度，適合注射。

5.由于分裝成等量小份因此能保證質(zhì)量一致性(10 mg將被分裝成20 份每份500 ug)。

體外實(shí)驗(yàn)水溶性腔腸素/Water-soluble Coelenterazine (CTZ-SOL) for in vitro use：成 分包括天熱腔腸素+水溶添加劑，產(chǎn)品規(guī)格：215 ug/瓶，加入10ml水后終濃度是50uM，加入5ml水后終濃度是100 uM。儲(chǔ)存：在密封狀態(tài)下-80°C長(zhǎng)期保存，-20°C短期保存，儲(chǔ)存環(huán)境為干燥和黑暗。

使用：可根據(jù)您的需求添加水溶性緩沖溶液（如.PBS），渦旋 后，用分光光度記分析結(jié)果。產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)：使用方便，無(wú)需先在乙醇中溶解。為達(dá)到*效果可以用不同的緩沖溶液溶解。

腔腸素h /Coelenterazine h：與Renilla熒光素酶或Gaussia熒光素酶使用具有一定的局限性。體外研究中比其他類(lèi)似物更適合與鈣離子激活發(fā)光蛋白共用。據(jù)報(bào)道，Coelenterazine h的發(fā)光強(qiáng)度高于天然腔腸熒光素10-20倍，因此是用來(lái)檢測(cè)鈣離子濃度微小變化的有力工具。

腔腸素f /Coelenterazine f： 腔腸素f與天然腔腸素的區(qū)別是氟取代了天然腔腸素R-1酚基上的羥基。當(dāng)腔腸素f作用于分離的水母發(fā)光蛋白能夠激活部分已氧化的腔腸素亞穩(wěn)定復(fù)合物，與天 然腔腸素相比合成的復(fù)合物僅產(chǎn)生總量子數(shù)的80% 。

腔腸素f的優(yōu)點(diǎn)：即需要更少的時(shí)間來(lái)形成發(fā)光蛋白復(fù)合物，這一般來(lái)說(shuō)是非常慢的過(guò)程（天然腔腸素一般在60分鐘內(nèi)只能完成40%）。然而由于大量快速發(fā) 射光與鈣離子有關(guān)，在同樣的增長(zhǎng)時(shí)間里發(fā)光蛋白復(fù)合物約產(chǎn)生多于20倍的信號(hào)且與天然腔腸素一樣產(chǎn)生更少的*相同的發(fā)射光譜。

e-Coelenterazine/腔腸素e：一種天然腔腸素衍生物，結(jié)構(gòu)上比天然腔腸素多了一個(gè)乙基，形成了一個(gè)額外的環(huán)。作為海腎熒光素酶的底物，其熒光強(qiáng)度是天然腔腸素的137%，其初始熒光強(qiáng)度是天然腔腸蘇素的750%。