1. 怎樣購買份量合適數(shù)量的慢病毒顆粒？

一套完整實驗所需的慢病毒顆粒包括：1. 含有目的基因的慢病毒顆粒，2. 陰性對照慢病毒顆粒，3. 用于預實驗的陽性對照慢病毒顆粒。

購買時可以根據(jù)目的細胞特性、檢測方法、培養(yǎng)器皿估算慢病毒顆粒的*用量，避免剩余的大量慢病毒顆粒超出*保存期；此外，GeneCopoeiaTM 同時提供高滴度低價格的陽性對照慢病毒顆粒，幫助您以較低的預算和較充足的材料完成預實驗的條件探索。初次使用慢病毒顆粒的研究者也可使用陽性對照慢病毒顆粒熟悉實驗過程。

2. 慢病毒顆?？梢杂糜趧游矬w內(nèi)（In vivo）實驗嗎？

GeneCopoeiaTM 提供的即用型慢病毒顆粒全部經(jīng)過純化、濃縮處理，去除了細胞碎片等雜質(zhì)，進一步降低免疫原性，適用于各類活體動物注射實驗和成瘤實驗。

3. 慢病毒顆粒對目的細胞的感染效率很低，如何提高感染效率？

提高感染效率的前提是保證細胞生長狀態(tài)良好。其次，可以通過提高 MOI 值來提高感染效率，也可以在培養(yǎng)基中加入 Polybrene (4-10 µg/mL) 提高感染效率。

4. 添加慢病毒顆粒后，細胞為什么大量死亡?

慢病毒顆粒對靶細胞有一定毒性。添加量過多、感染時間過長都可能對目的細胞 造成傷害。如遇上這種情況，建議您降低 MOI 值，并在感染細胞 4-8 小時后進行換 液（以新鮮的全培養(yǎng)基替換含慢病毒顆粒的舊培養(yǎng)基），長換液時間不可大于 12 小時。

5.Polybrene 是什么？在慢病毒顆粒感染中，Polybrene 添加越多越好嗎？

Polybrene 是常用的感染添加劑，通常的使用濃度為 4-10 µg/mL，Polybrene 能 顯著提高慢病毒的感染效率，通常能提高感染效率 2-10 倍，對部分細胞甚至可 提高感染效率 10-20 倍。當目的細胞 MOI 高于 20 時，我們建議在培養(yǎng)基中加入 Ploybrene(約 4-10 µg/mL) 適當提高感染效率。

然而，Polybrene 有一定的細胞毒性，不同細胞對 Polybrene 的敏感度和耐受性不同，部分細胞對 Polybrene 反應明顯，容易導致細胞狀態(tài)變差、形態(tài)發(fā)生變化、甚至死亡，因此并非每種細胞都適合添加 Polybrene。

在正式使用 Polybrene 前，建議在 1-10 µg/mL 范圍內(nèi)設置梯度，觀察細胞在該濃度下，24 小時后是否仍保持健康生長，從而確定該細胞的適 Polybrene 濃度。

6. 目的細胞可以被慢病毒顆粒感染，但 eGFP 的熒光強度很低，為什么？

在目的細胞被慢病毒顆粒感染過程中，eGFP 熒光強度取決于病毒感染細胞內(nèi)的慢病毒顆粒數(shù)、細胞本身的狀態(tài)、細胞類型以及觀察時間等。一般情況下，目的細胞感染慢病毒顆粒數(shù)越多，細胞增殖越快，eGFP 熒光會較強。慢病毒攜帶基因表達時間較長，一般在增殖較快的細胞中也需要感染 72-96 小時才會到達 eGFP 的表達高峰。對于增殖較慢的細胞，感染時間則需更長。建議如果您的細胞在感染后觀察的熒光強度較低，建議繼續(xù)培養(yǎng)一段時間再觀察。

7. 進行慢病毒顆粒感染后，為什么目的細胞用 qPCR 檢測不到目的基因表達量的變化？

如果使用的檢測方法是 qPCR，原因可能是目的基因含特殊序列結(jié)構、或與目的細胞系統(tǒng)不能兼容的問題，導致轉(zhuǎn)錄受影響，建議同時培養(yǎng)、感染目的細胞和 293T 工具細胞，同時進行檢測，如目的基因在 293T 細胞轉(zhuǎn)錄不受影響，則可能為目的基因與目的細胞的相互作用導致轉(zhuǎn)錄受阻。

8. 慢病毒顆粒在儲存期間不慎染菌，還可以繼續(xù)使用嗎？

如慢病毒顆粒不慎染菌，且實驗材料有限，可以使用 0.45 µm 濾膜對慢病毒進行濾菌操作。當然，該操作會導致一定程度的滴度損失及慢病毒顆?？偭繐p失。如條件允許，建議重新購買該種慢病毒。