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當(dāng)前位置:上海古朵生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>關(guān)于蛋白定量的N個(gè)問題,這篇幫您一一解答!
問1.同為蛋白定量產(chǎn)品,非標(biāo)記定量和標(biāo)記定量的適用場景有何差別?
標(biāo)記定量分析技術(shù)可同時(shí)比較2-10組樣品之間的蛋白組表達(dá)差異,是近年來定量蛋白質(zhì)組學(xué)常用的高通量篩選技術(shù)。而非標(biāo)記定量技術(shù)不需要標(biāo)記,定量樣本數(shù)不受限制,其中蛋白DIA定量分析技術(shù)被《Nature Methods》雜志評(píng)為2015年值得關(guān)注的技術(shù)之一,具有定量準(zhǔn)確性高、技術(shù)重現(xiàn)高的優(yōu)點(diǎn)。
兩相比較之下,非標(biāo)記定量DIA更適用于以下情況:
1)實(shí)驗(yàn)組數(shù)高于10組;
2)樣本來源于不同物種、不同組織或不同部位,需進(jìn)行平行蛋白組定量檢測;
3)需要區(qū)分樣本中的“有無蛋白”;
4)追求更的定性和定量效果,避免標(biāo)記和液相分組引入的實(shí)驗(yàn)誤差;
5)需要對(duì)采集的數(shù)據(jù)進(jìn)行多次重挖掘分析。
兩相比較之下,標(biāo)記定量iTRAQ/IBT更適用于以下情況:
1)實(shí)驗(yàn)組數(shù)低于10組(即同時(shí)比較的樣本數(shù)≤10);
2)樣本背景較為相似(相同物種和相同的樣本類型)。
這么看來,如果您的樣本量>10,想不受限制地獲得更為豐富和的數(shù)據(jù),DIA將是更合適的選擇
問2.蛋白定量研究結(jié)果的等待時(shí)間太長?
目前市面上常見的蛋白組定量產(chǎn)品的交付周期超過半月,為了給科學(xué)研究帶來更ji致的體驗(yàn),古朵生物推出了極速交付的蛋白組定量產(chǎn)品,從樣本檢測合格到數(shù)據(jù)產(chǎn)出,僅需13天!同時(shí)保證品質(zhì)無損、價(jià)格更優(yōu)。
問3. 如何保障蛋白定量的準(zhǔn)確性?
除了追求鑒定數(shù)量和價(jià)格,定量準(zhǔn)確才是硬道理。
問3.有哪些容易忽略的關(guān)鍵點(diǎn)會(huì)影響蛋白定量的準(zhǔn)確性?
對(duì)于標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組技術(shù)(iTRAQ/IBT/TMT),其優(yōu)勢在于將所需比較的樣品標(biāo)記后混在一起無偏好地同時(shí)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)和質(zhì)譜檢測,消除了系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)誤差,使得定量可比性更直接。但是,標(biāo)記定量技術(shù)帶來的另一個(gè)問題是共洗脫等因素導(dǎo)致的定量比值壓縮效應(yīng)(Nat Methods. 2011 Oct 2;8(11):937-40),也就是說,實(shí)際定量檢測到的差異倍數(shù)會(huì)比真實(shí)差異倍數(shù)小。所以,對(duì)于標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組分析得到的感興趣關(guān)鍵蛋白,通常建議后續(xù)做進(jìn)一步的PRM或MRM驗(yàn)證其定量準(zhǔn)確性。
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