去除抗血清中交叉反應(yīng)的抗體實(shí)驗(yàn)：

材料：試劑、試劑盒     
封閉緩沖液
封閉試劑
抗體
LB 頂層瓊脂糖
LB 平板瓊脂培養(yǎng)基
儀器、耗材     
硝酸纖維素濾膜
λ噬菌體載體
cDNA 文庫
     

實(shí)驗(yàn)步驟：
緩沖液和溶液
將貯存液稀釋到適當(dāng)?shù)臐舛取?/p>

封閉緩沖液

10 mmol/L Tris-Cl(pH8.0)
150 mmol/L NaCl
0.05%(V/V) Tween-20

封閉試劑 [1%(m/V）明膠，3%(m/V) 牛血清白蛋白，或 5%（m/V) 脫脂奶粉]
對(duì)于這些封閉實(shí)際的優(yōu)點(diǎn)，不同實(shí)驗(yàn)室各執(zhí)一詞。我們建議使用者進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)確定哪種封閉液與所選擇的抗體和第二抗體匹封*。封閉液可以貯存于 4°C, 重復(fù)使用數(shù)次。加入die氮化鈉至終濃度為 0.05%(m/V) 用以抑制微生物的生長(zhǎng)。

抗體

制備用于文庫篩選的抗體

培養(yǎng)基

LB 平板瓊脂培養(yǎng)基
每 90 mm 陪氏細(xì)菌培養(yǎng)皿需 30~35 ml 瓊脂培養(yǎng)基。每 150 mm 平板需約 50 ml 瓊脂培養(yǎng)基。平板必須干燥，否則，當(dāng)硝酸纖維素濾膜取出時(shí)，頂層瓊脂糖會(huì)被揭掉。通常，兩天前制備的平板在使用前將蓋略微揭開，在 37°C 溫育1~2 h, 效果很好。

LB 頂層瓊脂糖
用前在微波爐中短時(shí)加熱熔化頂層瓊脂糖，然后冷卻至 47°C。將熔化的頂層瓊脂在無菌管中分成 3 ml 等份（90 mm 平扳）或 7.5 ml 等份（150 mm 平板)。將分好的等份放在 47°C 干燥器或水浴中以防止頂層瓊脂凝固。

設(shè)備

硝酸纖維素濾膜
適合用于結(jié)合蛋白質(zhì)及免疫印跡的包括無 Triton X-100 硝酸纖維素濾膜（Millipore HATF 或等同產(chǎn)品）和硝酸纖維素衍生支持物，如 Hjrbond-C extra[Amersham Pharmarcia Biotech 公司]。尼龍膜和帶極性尼龍膜因?yàn)楣潭ǖ鞍踪|(zhì)的能力差且背景髙而不適用于免疫篩選。

附加試劑：

載體和菌株

λ噬菌體載體

利用表達(dá)載體和菌株構(gòu)建所需 cDNA 文庫

方法：

1. 將非重組λ噬菌體鋪在 10 塊瓊脂平板上，以得到半融合裂解的菌苔。

2. 按方案 1 步驟 5~12 所述，但略去 IPTG 處理，制備硝酸纖維素濾膜上的裂解菌苔印痕。
不必按方案 1 步驟 8 所述標(biāo)記濾膜。

3. 用封閉液以 1:10 稀釋用于篩選的抗體制劑。

4. 將濾膜與稀釋的抗體共同溫育 6 h。在處理后的抗體中加入 0.05% die氮化鈉，保存于 4°C 以備免疫篩選時(shí)使用。
稍加修改后，該方法即可用于細(xì)菌菌落的候篩選以去除抗大腸桿菌抗體可以在硝酸纖維素濾膜上固定一些不含有插入 cDNA 表達(dá)載體的細(xì)菌菌落。