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Western印跡法
這種技術是把電泳分離的組分從凝膠轉移到一種固相支持體,并以針對特定氨基酸序列的特異性試劑作為探針檢測之。Western使用的探針是抗體,它與附著于固相支持體的靶蛋白所呈現(xiàn)的抗原表位發(fā)生特異性反應。這種技術的作用是對非放射性標記蛋白組成的復雜混合物中的某些特異蛋白進行鑒別和鑒定。
儀器:高壓鍋、玻璃勻漿器、高速離心機、分光光度儀、—20℃低溫冰箱、垂直板電泳轉移裝置、恒溫水浴搖床、多用脫色搖床。
試劑:單去污劑裂解液、0.01mol/L PBS (pH7.3)、10%分離膠、4%濃縮校、G250考馬斯亮藍溶液、0.15mol/L NaCl 溶液、2X(5X)SDS上樣緩沖液、電泳緩沖液、轉移緩沖液、10X麗春紅染液、封閉液、TBST、TBS、洗脫抗體緩沖液、顯影液、定影液、抗體、化學發(fā)光試劑。
雜品與耗材:各種規(guī)格的吸頭、離心管和加樣器;各種規(guī)格的燒杯、量筒和平皿等玻璃器材;硝酸纖維素膜,乳膠手套,保鮮膜,搪瓷盤(>20×20cm),X-光片夾,X-光片,玻棒長短各一根,計時器,吸水紙。
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