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當(dāng)前位置:上海古朵生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>古朵:濃度測定新選擇,助力核酸定量
在分子生物學(xué)實驗中,核酸定量是*的一個過程,包括初提產(chǎn)物的核酸(gDNA 和 Total RNA)質(zhì)控,或者 PCR 產(chǎn)品和 NGS 文庫質(zhì)控。目前常見的定量儀器是 Nanodrop 和 Qubit,前者只需一兩微升的樣品,不需額外試劑,就可以利用核酸的紫外吸收特性,得到樣本濃度值,但當(dāng)樣本為 DNA,卻混有 RNA 時定量數(shù)據(jù)會出現(xiàn)較大偏差;而后者 Qubit 采用特異熒光染料法,可以特異地與不同種類的核酸鏈相結(jié)合,并在特定波長光源的激發(fā)下,發(fā)出熒光。Qubit 定量可以更加準(zhǔn)確,但是需要配套試劑,價格也比較高。
Qsep100 全自動核酸蛋白分析系統(tǒng),在原來檢測核酸片段長度的功能上增加了濃度定量功能,可以一步解決定性和定量兩個步驟,特別適合 NGS 平臺的文庫質(zhì)控流程。
例一:現(xiàn)對一個原濃度樣本為 6.5ng/ul(Qubit)的文庫樣本進(jìn)行定量分析,以 2 倍梯度,稀釋 5 個梯度,如下:
表中數(shù)據(jù)顯示,S2 卡夾檢測同一個樣本的五個不同濃度,所得 Avg.size 基本一致,大值和小值偏差為 2.7%;
以各管稀釋倍數(shù)的倒數(shù)為橫坐標(biāo) ,各管檢測所得的濃度為縱坐標(biāo),得到圖中的一次函數(shù)方程,擬合度 R2=0.9989;所測得濃度線性關(guān)系良好。
例二:穩(wěn)定性測試,對同一個樣本分 3 管做獨立檢測如下:
表中數(shù)據(jù)顯示,3 管樣本檢測所得 Avg.size 基本一致,濃度大值和小值偏差為 1.7%,表明 S2 卡夾檢測同一個樣本,3 次重復(fù)測得的片段分布及濃度定量重復(fù)性好,結(jié)果穩(wěn)定 。
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