Western Blot 即免疫印跡試驗(yàn)，可以利用 Western Blot 來(lái)比較在不同條件下，不同細(xì)胞組織中目的蛋白表達(dá)量的差異，屬于定性，半定量試驗(yàn)。既然有差異性比較，參照物*。Western Blot 試驗(yàn)中的標(biāo)準(zhǔn)（表達(dá)量）參照物即內(nèi)參，有了參照物才能準(zhǔn)確地比較目的蛋白表達(dá)量的差異。內(nèi)參一般選用管家基因表達(dá)的蛋白，它們?cè)诟鱾€(gè)組織細(xì)胞中表達(dá)相對(duì)恒定，不會(huì)因?yàn)橥獠織l件變化而引起表達(dá)量的變化。而且內(nèi)參可以監(jiān)測(cè)整個(gè)試驗(yàn)體系是否正常，比如蛋白提取過(guò)程，轉(zhuǎn)膜體系，顯色體系等。

beta Actin、beta Tubulin、GAPDH、Lamin B1、PCNA 等已作為成熟的內(nèi)參運(yùn)用到試驗(yàn)中，下面就大致介紹下如何選擇內(nèi)參：

樣本來(lái)源

● 如果是哺乳動(dòng)物的組織或細(xì)胞，主要以 beta Actin、beta Tubulin、GAPDH、Lamin B1、PCNA 為代表；

● 如果是植物樣本，主要以 actin、Rubisco 為代表。

目的蛋白定位

● 全細(xì)胞蛋白和細(xì)胞質(zhì)：beta Actin、beta Tubulin、GAPDH 等；

● 細(xì)胞核蛋白: PCNA 等；

● 核膜蛋白：Lamin B1 等；

● 胞膜蛋白：Na(+)/K(+) ATPase 等。

目的蛋白分子量

beta Actin、beta Tubulin、GAPDH 的分子量分別是 42kd，50kd，37kd，目的蛋白分子量能與內(nèi)參蛋白分子量相差 5kd 以上，才能分開(kāi)目的蛋白和內(nèi)參，寫(xiě)文章做圖也更美觀；

三大內(nèi)參

beta Actin，肌動(dòng)蛋白，細(xì)胞骨架蛋白。它們?cè)诟鹘M織和細(xì)胞中的表達(dá)相對(duì)恒定，在檢測(cè)蛋白的表達(dá)水平變化時(shí)常用它來(lái)做參照物。beta Actin 作為內(nèi)參是得到*的，針對(duì)大多數(shù)組織和細(xì)胞來(lái)說(shuō)的，它廣泛分布于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，表達(dá)量非常豐富。但是在一些少量特殊的情況下比如脂肪組織和細(xì)胞內(nèi)，beta Actin 的表達(dá)量就很少。

GAPDH，甘油醛-3-磷酸脫氫酶，該酶是糖酵解反應(yīng)中的一個(gè)酶，幾乎在所有組織細(xì)胞中都高水平表達(dá)，在同種細(xì)胞或組織中的表達(dá)量一般是恒定的，且很少受外部誘導(dǎo)物的影響。但比如缺氧和糖尿病等疾病存在下，會(huì)增加 GAPDH 在特定細(xì)胞和組織中的表達(dá)。

beta Tubulin，微管蛋白，細(xì)胞骨架蛋白。作為內(nèi)參抗體，beta Tubulin 表達(dá)通常不會(huì)發(fā)生改變，因此被廣泛用于 Western Blot 內(nèi)參，也常被用于免疫染色觀察細(xì)胞的微管結(jié)構(gòu)。