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舉例大腸桿菌菌種活化的方法和詳細步驟
閱讀：170 發(fā)布時間：2024-6-12菌種的活化就是將處于保藏狀態(tài)的菌種放入合適的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，逐級增大培養(yǎng)是為了得到純而壯的培養(yǎng)物，可以理解為就是為了獲得活力旺盛的、接種數(shù)量足夠的培養(yǎng)物進行培養(yǎng)。菌種發(fā)酵一般情況下需要2-3代的復(fù)壯過程，因為保存時的條件往往和培養(yǎng)時的條件不相同，所以要活化,讓菌種逐漸適應(yīng)培養(yǎng)環(huán)境
中藥標(biāo)準(zhǔn)對照品研究中心建議實驗要明白菌種活化的情況就需要了解菌種保藏的方式和方法。目前國際和國內(nèi)常用的菌種保存方法包括：定期移植法、液體石蠟法、沙土管法、真空冷凍干燥法、80℃ 冰箱凍結(jié)法、液氮超低溫凍結(jié)法。
對于不同的保存方式活化的方式也不同：
1 定期移植法的菌種復(fù)蘇較簡單，直接轉(zhuǎn)接即可；
2 液體石蠟法保存的菌種在復(fù)蘇時，挑取少量菌體轉(zhuǎn)接在適宜的新鮮培養(yǎng)基上，生長繁殖后，再重新轉(zhuǎn)接一次；
3 沙土管法保存菌種在復(fù)蘇時，在無菌條件下打開沙土管，取部分沙土粒于適宜的斜面培養(yǎng)基上，長出菌落后再轉(zhuǎn)接一次?；蛉∩惩亮Ｓ谶m宜的液體培養(yǎng)基中，增殖培養(yǎng)后再轉(zhuǎn)接斜面；
4 真空冷凍干燥法保存菌種在復(fù)蘇時先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部，將安瓿管頂部燒熱， 用無菌棉簽沾冷水，在頂部擦一圈，頂部出現(xiàn)裂紋，用挫刀或鑷子頸部輕叩一下，敲下已開裂的安瓿管的頂端，用無菌水或培養(yǎng)液溶解菌塊，使用無菌吸管移入新鮮培養(yǎng)基上，進行適溫培養(yǎng)；
5 -80℃ 冰箱凍結(jié)法保存菌種復(fù)蘇時，從冰箱中取出安瓿管或塑料凍存管，應(yīng)立即放置38℃-40℃水浴中快速復(fù)蘇并適當(dāng)快速搖動。直到內(nèi)部結(jié)冰全部溶解為止，約需50秒-100秒。開啟安瓿管或塑料凍存管，將內(nèi)容物移至適宜的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)
6 液氮超低溫凍結(jié)法保存菌種復(fù)蘇與-80℃ 冰箱凍結(jié)法保存菌種復(fù)蘇相似，從液氮罐中取出安瓿管或塑料凍存管，應(yīng)立即放置在38℃-40℃水浴中快速復(fù)蘇并適當(dāng)搖動。直到內(nèi)部結(jié)冰全部溶解為止，一般約需50秒-100秒。開啟安瓿管或塑料凍存管，將內(nèi)容物移至適宜的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)。
總結(jié)一下菌種活化需要以下幾個步驟：
第一配置菌種適宜生長的培養(yǎng)基
第二將菌種從保藏狀態(tài)恢復(fù)到室溫狀態(tài)，比如將冷凍的菌種解凍
第三將通過操作將保藏的菌種接種到培養(yǎng)基中培養(yǎng)，此步驟稱為菌種復(fù)壯
第四步挑選培養(yǎng)基茁壯的菌落，挑選其中部分菌落接種到新的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，重復(fù)此步驟2-3次，從而得到生長良好的菌落經(jīng)過這四個步驟就到達將菌種從保藏狀態(tài)活化的最終目的.
舉例大腸桿菌菌種活化方法：配活化培養(yǎng)基（LB）： 活化大腸桿菌配方：0.5g酵母粉，1g蛋白胨，1g氯化鈉，稀釋到100ml復(fù)蘇細胞（去掉DMSO及冷凍過程中產(chǎn)生的有毒物質(zhì)）
材料：液氮中的細胞共1毫升：含20%血清（FBS），10%DMSO（防止細胞內(nèi)產(chǎn)生冰晶），培養(yǎng)基
步驟：一、從液氮（約-190度）中取出細胞（管中有1ml細胞）（稍微抖掉液體）二、快速放入37度水浴1分鐘。三、加入1ml DMEM 培養(yǎng)基融化冰晶。四、全部移入離心管中，管口封口膜封口；五、離心：1200r/min，5min。六、去上清（用大槍（1-5ml）一次吸出，吸時沉淀朝上）；G2 細胞沉淀較明顯
七、先（用1ml 小槍）加到離心管中1 ml培養(yǎng)基并吹打吸出到培養(yǎng)瓶中，再加1 ml培養(yǎng)基潤洗離心管吸出到培養(yǎng)瓶中，然后用大槍加3ml培養(yǎng)基到培養(yǎng)瓶中（補足5毫升）；八、培養(yǎng)瓶放入37度溫箱。
用多少毫升95%的酒精能配成400毫升75%的酒精？
75%*400毫升=95%*未知數(shù) 未知數(shù)=約316毫升