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鑒定細胞產(chǎn)生的細胞因子等炎癥介質(zhì)的分析
閱讀：78 發(fā)布時間：2023-10-12各種激活類型的細胞可以分泌細胞因子，趨化因子和其他炎癥介質(zhì)，如穿孔素，粒酶免疫或炎癥反應(yīng)的一部分。如ELISA和BD?式微珠陣列(CBA)測量整個細胞群所產(chǎn)生的分泌蛋白的方法。與此相反，細胞內(nèi)流式細胞儀允許于感興趣的細胞群，表型鑒定的個別類型的細胞產(chǎn)生的細胞因子等炎癥介質(zhì)的分析。
流式細胞儀檢測細胞內(nèi)使得能夠容易地確定是否由激活的細胞群的細胞因子的產(chǎn)生的結(jié)果，產(chǎn)生大量的細胞因子或一個人口眾多的細胞，每個細胞中的細胞因子生產(chǎn)少量的幾個單元格。此外，細胞內(nèi)流式細胞儀使得能夠容易地測量多種細胞因子的同時，以確定多官能性細胞，細胞內(nèi)細胞因子染色，也可用于各種各樣的研究，其中包括B和T細胞的分化和可塑性。
通常是由于細胞因子分泌的蛋白質(zhì)，他們必須先被困在細胞內(nèi)通過使用蛋白轉(zhuǎn)運抑制劑。的兩種蛋白質(zhì)運輸抑制劑：“莫能菌素A(BD GolgiStop)"(BD GolgiPlug)。莫能菌素通過互動與高爾基體跨膜娜+ + / H +運輸，防止蛋白的分泌，而菌素A再分配順/內(nèi)側(cè)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)高爾基復(fù)合體細胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)。因此，最好選擇不同運輸?shù)鞍滓种苿┘毎蜃雍臀锓N。見表1。
CD8 +細胞中的IFN-γ和IL-2產(chǎn)生刺激外周血單核細胞與腸毒素B進行6小時的布雷菲德菌素A的存在刺激后，細胞被固定和透性，使用BD Cytofix / Cytoperm的的緩沖液系統(tǒng)。以下的熒光抗體：CD3 FITC，CD4 PERCP循環(huán)?5.5，CD8艷紫421，IFN-γ的PE，和IL-2的APC細胞染色。然后洗滌細胞。最后，使用BD FACSVerse的?流式細胞儀分析細胞。
屋宇署已簡化具備完善的工具包，緩沖系統(tǒng)，以及豐富的面板的熒光抗體細胞因子和細胞表面標志物的檢測。多種熒光染料偶聯(lián)的表面標志物和細胞因子的抗體。這使得在染色面板設(shè)計的靈活性，支持高含量多色流式細胞儀分析，以獲得最珍貴的細胞樣本數(shù)據(jù)。
BD FastImmune?套件包含熒光抗體測試的雞尾酒，適當?shù)牡鞍踪|(zhì)運輸抑制劑，兼容的緩沖區(qū)，作最佳的準備和詳細的協(xié)議，染色，產(chǎn)生細胞因子的細胞從全血的檢測。板載檢測BD FACSVerse流式細胞儀系統(tǒng)進一步簡化這個過程。BD Cytofix / Cytoperm的緩沖已被成千上萬的出版物引用，產(chǎn)生細胞因子的細胞通過流式細胞儀分析。研究人員選擇自己的細胞因子的利息蛋白轉(zhuǎn)運抑制劑使用BD Cytofix / Cytoperm的緩沖系統(tǒng)，固定，通透和細胞染色，流式細胞儀分析。
抗原特異性IFN-γ產(chǎn)生由巨細胞病毒(CMV)的pp65抗原刺激的CD4 + CD69 + T淋巴細胞雙色流式細胞儀散點圖表明IFN-γ的CD4和CD69的表達被未受刺激的T細胞(左圖)，SEB刺激(作為陽性對照，中心板)，CMV pp65抗原刺激(右圖)的樣品從兩個捐助者。人類全血刺激菌素A定影之前，透，染色使用BD FastImmune?3色CD4細胞內(nèi)細胞因子檢測試劑盒的存在。使用BD流式細胞儀FACSVerse和的BD FACSuite?軟件研發(fā)試驗獲得的數(shù)據(jù)。