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簡化細胞凋亡研究的工具
閱讀：67 發(fā)布時間：2023-10-11 有許多凋亡觸發(fā)器，其中包括某些細胞因子，蛋白質(zhì) - 蛋白質(zhì)相互作用和化學(xué)品。一旦開始凋亡，線粒體膜電位變化，可以測量通過流式細胞儀使用BD：MitoScreen(JC-1)流式細胞儀檢測試劑盒。
線粒體膜電位導(dǎo)致線粒體膜通透性增加，并釋放出可溶性蛋白，如和親半胱天冬酶的增加。
半胱天冬蛋白酶激活后，天殘基的裂解在凋亡過程中的早期是一系列?；钴S的半胱天冬酶可以切割許多蛋白質(zhì)，包括聚ADP核糖聚合酶(PARP)和半胱天冬。
DNA片段化是在細胞凋亡導(dǎo)致的核酸內(nèi)切酶的活化在細胞凋亡過程中的最后階段。有一些已建立的方法，包括分離和分離的DNA片段通過瓊脂糖凝膠電泳和末端標記的DNA片段化的研究。
BDAPO的BrdU試劑盒采用結(jié)束標簽或末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TDT)缺口末端標記法(TUNEL法)支持研究的DNA片段。在該試驗中，末端轉(zhuǎn)移酶催化依賴模板的bromolated的脫氧尿苷三磷酸(溴的dUTP)，羥基(OH)的3'-末端的雙鏈和單鏈DNA。的Br-dUTP的成立后，這些終端站點使用流式細胞儀，雙和單鏈DNA識別染色細胞抗BrdU標記。與此相反，的BrdU增殖測定結(jié)合到新合成的DNA中的BrdU，DNA鏈斷裂的網(wǎng)站。
用壓倒性數(shù)目的可用技術(shù)和產(chǎn)品，選擇最合適的方法是非常困難的。為了幫助使這個選擇更容易，概述總結(jié)市售的檢測從生物學(xué)的角度來看。
劈開caspases的測量和PARP半胱天冬是細胞凋亡的重要發(fā)起者。最早，最一貫觀察細胞凋亡的特點之一是一系列的胞漿蛋白酶，叫做半胱天冬酶的激活。當被激活細胞凋亡，半蛋白酶切割多蛋白底物一起，導(dǎo)致細胞結(jié)構(gòu)和功能的喪失，并最終導(dǎo)致細胞死亡。特別是，-8，-9，半胱天冬酶-3已經(jīng)牽連在細胞凋亡：caspase-9的線粒體途徑，Caspase-8在Fas/CD95途徑，通過多種途徑活化的caspase-3的下游。
其他技術(shù)檢測細胞凋亡各種試劑進行測量半胱天冬酶，特別是caspase-3的。他們包括專門針對蛋白酶的活性形式的抗體。這些抗體是在各種不同的格式，并提供可用于成像，流式細胞術(shù)，ELISA，Western印跡。一系列個別熒光肽底物和抑制劑對caspase活性檢測工具包，隨時可以使用檢測板。是這樣設(shè)計的水解作用而釋放的熒光基團或發(fā)色基團的基團的活性的人或小鼠的半胱天冬酶的結(jié)果，合成的四肽底物的基礎(chǔ)上使用。連同半胱天冬酶抑制劑和活性半胱天冬酶酶的半胱天冬酶的活性測定實驗設(shè)計方案的靈活性。