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　PCR is the short for Polymerase Chain Reaction,中文是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),簡(jiǎn)單的說(shuō)就是在體外模擬發(fā)生在細(xì)胞內(nèi)的DNA快速擴(kuò)增特定基因的技術(shù).即屬于DNA amplification中的主要方式.基本反應(yīng)步驟我就不具體講了 相信不是學(xué)生命工程專業(yè)的也不用去學(xué),知道有3步就行,高溫變性,annealing(這個(gè)中文我沒(méi)有查到,大概意思就是降低反應(yīng)溫度,并把溫度保持在55攝式度左右一分鐘,叫低溫去火)適溫延伸. 這項(xiàng)技術(shù)主要應(yīng)用在學(xué),古生物學(xué)和研究人類起源等方面.近年來(lái)發(fā)現(xiàn)存在于原核生物基因組中的DNA片段，主要為重復(fù)基因外回文序列(repetitive extr-agenic palindromic,REP)和腸菌重復(fù)基因問(wèn)基準(zhǔn)序列(enterobacterial repetitive intergenic consensus,ERIC)。這些短重復(fù)序列在細(xì)菌基因組中廣泛分布并具有一定的保守性。利用其保守序列設(shè)計(jì)長(zhǎng)度為15～22個(gè)堿基的引物，可擴(kuò)增細(xì)菌基因組中位于重復(fù)序列之間的大小不同的DNA片段，通過(guò)瓊脂糖電泳可得到重復(fù)性較好、具有種特異性或菌株特異性的DNA指紋圖譜。REP-PcR指紋分析技術(shù)即是建立在上述幾種短重復(fù)序列引物基礎(chǔ)上的DNA指紋分析技術(shù)。

　　許多研究者的工作表明，不同引物REP-PCR指紋分析結(jié)果之間在主要類群的劃分上表現(xiàn)出較好的一致性，但對(duì)關(guān)系非常密切的菌株的聚類結(jié)果往往隨引物不同而異。為消除這種差別，有些研究者將雙引物或多引物．REP—PCR指紋分析數(shù)據(jù)合并在一起進(jìn)行聚類分析，以增加菌株指紋圖潛的特異性。

　　單鏈構(gòu)象多態(tài)性(single stranded conformation polymophism,SSCP)分析，是在PCR產(chǎn)物中加入高濃度的甲酰胺，并在80～90℃變性為單鏈，再行非變性的聚丙烯酰胺凝膠電泳，然后銀染或放射自顯影，就可得到多態(tài)性的檢測(cè)結(jié)果。此法的原理是由于正常序列與變異序列的單鏈構(gòu)象不同，從而電泳的遷移率不同，因此能在電泳上分離區(qū)別。該法靈敏度*，能鑒別一個(gè)堿基的差異。對(duì)于一個(gè)環(huán)境微生物區(qū)系來(lái)說(shuō)，有許多不同的種群存在其中，如何應(yīng)用某種特異的基因序列進(jìn)行種群多態(tài)性的研究，沒(méi)有理想的分離技術(shù)是做不到的。SSCP可將序列長(zhǎng)度相同而堿基排列不同的片段區(qū)分開(kāi)，這樣不同種的環(huán)境微生物通過(guò)圖譜顯示出來(lái)。同時(shí)可進(jìn)行切膠純化直接測(cè)序，與GenBank上的已知序列比較，得到種特異的基因序列，達(dá)到分類的目的。

　　總之，由于PCR技術(shù)可以快速特異地?cái)U(kuò)增任何期望的DNA片段和目的基因，因而在環(huán)境微生物的檢測(cè)與鑒定中有重要的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。但在實(shí)際應(yīng)用中也存在一些問(wèn)題，如極少量外源性DNA引起的污染可能導(dǎo)致假陽(yáng)性出現(xiàn)；試驗(yàn)條件不當(dāng)導(dǎo)致產(chǎn)物產(chǎn)生突變；引物設(shè)計(jì)及靶序列選擇不當(dāng)可能降低靈敏度和特異性等。盡管還存在著一定的問(wèn)題，相信隨著該技術(shù)的進(jìn)一步普及、發(fā)展和完善，可以預(yù)料，今后PCR技術(shù)在環(huán)境微生物領(lǐng)域中的應(yīng)用將進(jìn)一步擴(kuò)大，特別是在檢測(cè)水體、土壤中的致病細(xì)菌、病毒及指示菌等方面發(fā)揮愈來(lái)愈大的作用。

　　PCR的衍生技術(shù)可以模擬生物體的合成，用來(lái)測(cè)序，可以針對(duì)的基因，設(shè)計(jì)引物，制成疾病診斷試劑盒，還有可以針對(duì)微衛(wèi)星序列，可以做親子鑒定，加入熒光物質(zhì)，直接做熒光pcr