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技術(shù)文章

豬調(diào)節(jié)激活正常T細(xì)胞表達(dá)分泌因子(RANTES)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)

閱讀:107          發(fā)布時(shí)間:2019-7-19

豬調(diào)節(jié)激活正常T細(xì)胞表達(dá)分泌因子(RANTES)ELISA試劑盒

英文簡(jiǎn)稱(chēng):Pig regulated on activation, normal T cell expressed and secreted factor (RANTES) ELISA kit

產(chǎn)品貨號(hào):KS17973

規(guī)格:96T/48T

品牌:科順生物

用途:科研實(shí)驗(yàn)等領(lǐng)域科學(xué)研究,不得用于臨床診斷

運(yùn)輸:快遞(根據(jù)客戶(hù)要求,選擇具體的運(yùn)輸方式)

試劑盒種屬:羊、雞、鴨、魚(yú)、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉(cāng)鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動(dòng)植物。

豬調(diào)節(jié)激活正常T細(xì)胞表達(dá)分泌因子(RANTES)ELISA試劑盒檢測(cè)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被樣本抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的樣本呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。

豬調(diào)節(jié)激活正常T細(xì)胞表達(dá)分泌因子(RANTES)ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法

1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3. 細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 

自備物品

1.酶標(biāo)儀(450nm)

2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫箱

豬調(diào)節(jié)激活正常T細(xì)胞表達(dá)分泌因子(RANTES)ELISA試劑盒操作注意事項(xiàng)

1. 試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。

2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

3. 濃度為0的S0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白;按照說(shuō)明書(shū)操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍,終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

4. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5. 所有液體組分使用前充分搖勻。

豬調(diào)節(jié)激活正常T細(xì)胞表達(dá)分泌因子(RANTES)ELISA試劑盒組成

名稱(chēng) 96孔配置 48孔配置 備注

微孔酶標(biāo)板 12孔×8條 12孔×4條 無(wú)

* 6mL 3mL 無(wú)

檢測(cè)抗體-HRP 10mL 5mL 無(wú)

20×洗滌緩沖液 25mL 15mL 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋

底物A 6mL 3mL 無(wú)

底物B 6mL 3mL 無(wú)

終止液 6mL 3mL 無(wú)

封板膜 2張 2張 無(wú)

說(shuō)明書(shū) 1份 1份 無(wú)

自封袋 1個(gè) 1個(gè) 無(wú)

注:標(biāo)準(zhǔn)品濃度都不相同,麻煩聯(lián)xi客服索取相應(yīng)說(shuō)明書(shū)

試劑的準(zhǔn)備

20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1:20稀釋?zhuān)?份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

豬調(diào)節(jié)激活正常T細(xì)胞表達(dá)分泌因子(RANTES)ELISA試劑盒洗板方法

1. 手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

2. 自動(dòng)洗板機(jī):每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

豬調(diào)節(jié)激活正常T細(xì)胞表達(dá)分泌因子(RANTES)ELISA試劑盒操作步驟

1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

3. 樣本孔先加待測(cè)樣本10μL,再加*40μL;空白孔不加。

4. 除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

結(jié)果判斷

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn):在Excel工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線(xiàn)性回歸曲線(xiàn),按曲線(xiàn)方程計(jì)算各樣本濃度值。

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