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腺病毒轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞；AAV-293操作步驟

閱讀：123發(fā)布時(shí)間：2019-11-06

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                  腺病毒轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞；AAV-293操作步驟

那年的十一月，那段的十一月，已經(jīng)整整一年了，我清晰的記得那年的寒冷是不能用今年的寒冷來(lái)形容，冰冷的風(fēng)不帶一點(diǎn)間隙的從四面八方?jīng)坝慷鴣?lái)，天空總是陰沉沉的，每天都在下著細(xì)雨，寒冷又叫人絕望。接下來(lái)介紹 腺病毒轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞；AAV-293操作步驟

操作步驟：

1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量*，使*的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去*，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止*作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。

2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。


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