DNA損傷分析試劑盒，用于在體內(nèi)和體外測(cè)量8.8 kb線粒體DNA的損傷，通過(guò)QPCR分析，對(duì)復(fù)制的DNA進(jìn)行實(shí)時(shí)PCR定量：

艾美捷Detroit R&D DNA損傷分析試劑盒#DD2H、#DD2M、#DD2R 包含DNA聚合酶、QPCR引物和dNTPs，real-time PCR的引物，以及用于real-time PCR定量的8.8kb real-time PCR標(biāo)準(zhǔn)品(不包括SYBR Green master mix for real-time PCR)。重復(fù)分析20個(gè)樣品（45個(gè)反應(yīng)）。

整套試劑盒可用于人、大鼠或小鼠的血液、細(xì)胞或組織。由于缺失和鏈斷裂造成的DNA損傷可以用此試劑盒檢測(cè)，使用微板格式的DNA分離技術(shù)，該試劑盒可以很容易地用于高通量格式。在這方面，Detroit R&D研發(fā)分析是一個(gè)很有前途的工具，因?yàn)榭焖?，操作?jiǎn)單，只需要少量的測(cè)試物質(zhì)。  

DNA損傷分析試劑盒為基礎(chǔ)研究和工業(yè)應(yīng)用提供了強(qiáng)大的工具。這種創(chuàng)新的方法是基于在一個(gè)長(zhǎng)（8.2-8.8 kb）的線粒體DNA片段上進(jìn)行30個(gè)周期的定量PCR，然后使用實(shí)時(shí)PCR進(jìn)行定量。    

左：實(shí)時(shí)PCR標(biāo)準(zhǔn)品擴(kuò)增圖；右：實(shí)時(shí)PCR分析8.8kb線粒體DNA的標(biāo)準(zhǔn)曲線

候選藥物通常被生物轉(zhuǎn)化為有活性的毒性代謝物，通過(guò)COX-2過(guò)氧化物酶活性破壞DNA。Comet和OxyDNA檢測(cè)分別檢測(cè)斷裂DNA和氧化DNA。然而，候選藥物形成的數(shù)千種不同的DNAs，無(wú)法用這種方法檢測(cè)到。Detroit R&D開(kāi)發(fā)了一種LQPCR檢測(cè)方法，用于檢測(cè)數(shù)千種不同候選藥物引起的DNA損傷修復(fù)缺陷，著色性干皮病A組（XPA）人成纖維細(xì)胞系致敏DNA損傷發(fā)生的候選藥物。表達(dá)COX-2的XPA細(xì)胞具有較強(qiáng)的COX-2催化活性。

LQPCR DNA損傷檢測(cè)的應(yīng)用實(shí)例：

用一種已知的COX-2激活的DNA損傷劑benzo(a)pyrene-7,8-dihydrodiol (BPD)，COX-2過(guò)氧化物酶活性的底物- tert-butyl hydroperoxide (t-BOOH)處理表達(dá)COX-2的XPA細(xì)胞。采用LQPCR分析DNA損傷。如上圖柱狀圖所示，COX-2依賴性DNA損傷在BPD治療后顯著增加。   

除了細(xì)胞系統(tǒng)外，LQPCR DNA損傷測(cè)定還可用于新鮮或冷凍的組織或血液標(biāo)本。因此，這種LQPCR DNA損傷試驗(yàn)不僅可以用于篩選細(xì)胞內(nèi)的候選藥物，也可以用于篩選體內(nèi)的候選藥物。