ELISpot Plus for enumeration of cells secreting TNF-α

This kit is ideal for users who want a convenient and sensitive assay. The assay is designed for the enumeration of cells secreting mouse TNF-α. The kit includes ELISpot plates pre-coated with monoclonal antibody, biotinylated detection antibody, Streptavidin-ALP and ready-to-use BCIP/NBT-plus substrate.

Pre-coated plates reduce assay time and minimize variability.

艾美捷小鼠腫瘤壞死因子α-ELISpot試劑盒基本參數(shù)：

中文名稱：小鼠腫瘤壞死因子α-ELISpot試劑盒

英文名字：ELISpot Plus: Mouse TNF-alpha (ALP)

編號(hào)：3511-4APW-2

規(guī)格：2plates

應(yīng)用程序：ELISpot

反應(yīng)性：老鼠

BCIP/NBT加基質(zhì)（25 ml）

檢測(cè)抗體在含0.02%疊-氮化鈉的無(wú)菌過(guò)濾（0.2μm）PBS中提供。Streptavidin ALP以0.1M Tris緩沖液和0.002%Kathon CG提供。小瓶已過(guò)滿，以確保回收規(guī)定量。

存儲(chǔ)：在環(huán)境溫度下運(yùn)輸。到達(dá)時(shí)，所有試劑應(yīng)在4-8°C下冷藏儲(chǔ)存。板材應(yīng)保持在室溫下。

艾美捷小鼠腫瘤壞死因子α-ELISpot試劑盒使用指南：

A ELISpot板的制備（無(wú)菌條件）

1.從密封包裝中取出平板，用無(wú)菌PBS（200μl/孔）洗滌4次。

2.用含有10%與細(xì)胞懸浮液相同血清的培養(yǎng)基（200μl/孔）調(diào)節(jié)平板。在室溫下培養(yǎng)至少30分鐘。

B在平板中培養(yǎng)細(xì)胞（無(wú)菌條件）

1.取出培養(yǎng)基，加入刺激物，然后加入細(xì)胞懸浮液?；蛘撸?xì)胞和刺激物可以在加入平板之前混合。

2.將平板置于37°C的含5%CO2的加濕培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)12-48小時(shí)。在此期間不要移動(dòng)板，并采取措施避免蒸發(fā)（例如，用鋁箔包裹板）。

C斑點(diǎn)檢測(cè)

1.通過(guò)清空平板去除細(xì)胞，并用PBS（200μl/孔）洗滌5次。

2.在含有0.5%胎牛血清（PBS-0.5%FCS）的PBS中將檢測(cè)抗體（MT11B10生-物-素）稀釋至0.5μg/ml。加入100μl/孔，在室溫下孵育2小時(shí)。

3.如上所述清洗板（步驟C1）。

4.將Streptavidin ALP（1:1000）在PBS-0.5%FCS中稀釋，并加入100μl/孔。在室溫下孵育1小時(shí)。

5.如上所述清洗板（步驟C1）。

6.通過(guò)0.45μm過(guò)濾器過(guò)濾即用基質(zhì)溶液（BCIP/NBT plus），并添加100μl/孔。直到出現(xiàn)明顯的斑點(diǎn)。

7.通過(guò)在自來(lái)水中大量沖洗來(lái)阻止顏色發(fā)展。如果需要，移除暗渠（板下的軟塑料）并沖洗膜的下側(cè)。

8.讓盤子保持干燥。在ELISpot讀取器或解剖顯微鏡中檢查和計(jì)數(shù)斑點(diǎn)。

9.在室溫下將盤子存放在黑暗中。