nickases內(nèi)切酶背景：

CRISPR/Cas9 是細(xì)菌和古細(xì)菌在長期演化過程中形成的一種適應(yīng)性免疫防御系統(tǒng)，改造后的 II 型 CRISPR/Cas9 系統(tǒng)在基因的定點(diǎn)修飾中展現(xiàn)出巨大的應(yīng)用潛能。脫靶效應(yīng)是目前 CRISPR/Cas9 技術(shù)應(yīng)用的一個難題，在基因編輯應(yīng)用中，可能會出現(xiàn)難以預(yù)測的后果。

Cas9 Nuclease 具有兩個切割活性中心，從而實(shí)現(xiàn)在 sgRNA 靶序列特定位點(diǎn)引入 DNA 雙鏈斷裂（DSB）。NLS-Cas9（D10A）Nickase 在 Cas9 Nuclease 基礎(chǔ)上突變其中一個切割活性中心，其能在與 sgRNA 靶序列互補(bǔ)的DNA 鏈上產(chǎn)生切口，從而形成功能性的單鏈斷裂，并且通過在蛋白兩端加了核定位序列(NLS),可把蛋白送到細(xì)胞核內(nèi)進(jìn)行基因組編輯， 配合一對 gRNA 使用，可實(shí)現(xiàn) Cas9 Nuclease 相同的基因編輯效果，由于有效的識別序列由 20 bp 增加至 40 bp，可明顯減少意外的脫靶基因修飾，從而顯著提高 CRISPR/Cas9 技術(shù)基因修飾的特異性。

艾美捷nickases內(nèi)切酶特點(diǎn)：

純蛋白體系，避免 CRISPR 基因敲除時引入質(zhì)?；虿《靖蓴_； 可顯著降低脫靶效應(yīng)。

艾美捷nickases內(nèi)切酶用途：

1，基于蛋白與 sgRNA 轉(zhuǎn)染的非病毒載體 CRISPR 基因敲除；

2，基于蛋白與 sgRNA 轉(zhuǎn)染的非病毒載體 CRISPR 基因敲入；

3，sgRNA 剪切靶點(diǎn) DNA 效率檢測，降低體內(nèi)篩選成本；

4，體外剪切靶 DNA 的特異位點(diǎn)。

艾美捷nickases內(nèi)切酶應(yīng)用實(shí)例：

帶有靶位點(diǎn)的超螺旋 DNA（cccDNA）；

酶切產(chǎn)生切刻后的開環(huán) DNA（ocDNA）；

50 -100 ng 酶可有效切割 cccDNA（>95%）。