脲酶催化尿素水解：

（NH₂）₂CO+3H₂O→CO₂+2NH₄OH

Jespersen (1975) 報(bào)道氨基甲酸銨是在檸檬酸鹽和 Tris 緩沖液中產(chǎn)生的。

脲酶存在于許多細(xì)菌、幾種酵母和許多高等植物中。Varner (1960) 對(duì)其進(jìn)行了審查。兩個(gè)好的來(lái)源是：杰克豆（Canavlia ensiformis），它已經(jīng)被結(jié)晶和*研究，以及巴氏桿菌。

該酶在尿素測(cè)定中很重要。參見(jiàn) Guilbault 和 Montalvo (1970)。已報(bào)道其固定化：等。(1974)、James 和 Pring (1975)、Messing (1974)、Nakamoto等人。(1975)、Sundaram (1973) 和 Tran-Minh 和 Broun (1975)。

艾美捷Worthington 杰克豆脲酶的特性：

分子量：480,000 (Fishbein et al . 1970)。

組成： 單體（a）脲酶可以聚合形成約三百萬(wàn)道爾頓的六個(gè)單元聚合物。（Fishbein等人1970；Fishbein 和 Nagarajan 1972a）。Andrews 和 Reithel (1970) 報(bào)告了巰基。Contaxis 和 Reithel (1971) 表明分子可以分成兩半而不會(huì)失去活性。另見(jiàn) Contaxis 和 Reithel (1972)、Fishbein 和 Nagarajan (1972b)、Lynn (1970) 以及 Bailey 和 Boulter (1969)。

最佳 pH 值：7.4（Cesareo 和 Langton，1992）。

Km：Tris·HCl 中 1.3mM（Cesareo 和 Langton，1992）。

抑制劑：重金屬。形成NH 4+離子。另見(jiàn) Fishbein 和 Carbone (1965)。鈉和鉀離子是抑制劑（Cesareo 和 Langton，1992）。

特異性：脲酶對(duì)尿素和jing基脲具有特異性（Fishbein 和 Carbone 1965）。另見(jiàn) Sundaram 和 Laidler (1970)。

穩(wěn)定劑：濃度為 1 X 10 -3 M 的 EDTA。50% 甘油溶液可在 4°C 下保護(hù)脲酶結(jié)晶懸浮液數(shù)月。

艾美捷Worthington脲酶測(cè)定方法：

方法：Worthington 采用了一種測(cè)定方法，其中通過(guò)將氨生成與gu氨酸脫氫酶反應(yīng)偶聯(lián)來(lái)測(cè)量尿素的水解。

在zhi定條件下，在 25°C 和 pH 7.6 條件下，一個(gè)單位會(huì)導(dǎo)致每分鐘氧化 1 微摩爾 NADH。除了提高靈敏度外，該測(cè)定方法還具有可以對(duì)其進(jìn)行操作以允許對(duì)尿素進(jìn)行定量的優(yōu)點(diǎn)。

試劑：

0.1 M 磷酸鉀緩沖液，pH 7.6

磷酸鹽緩沖液中的 0.023 M Adenosine-5'-diphosphate (ADP)

磷酸鹽緩沖液中的 0.0072 M NADH

磷酸鹽緩沖液中的 0.026 M a-酮戊二酸

磷酸鹽緩沖液中的 1.8 M 尿素

gu氨酸脫氫酶：在 50% 甘油或磷酸鹽緩沖液中稀釋至約 500 單位/ml。使用期間冷藏。

酶：

將酶以 1 mg/ml 溶解在 0.1 M 磷酸鹽緩沖液中，pH 7.6。臨用前，在緩沖液中進(jìn)一步稀釋以獲得 0.02-0.04 ΔA/分鐘的速率。

程序：

將分光光度計(jì)調(diào)整到 340 nm 和 25°C。將移液器移入每個(gè)比色皿，如下所示：

0.10 M 磷酸鹽緩沖液，pH 7.6 2.4 毫升

0.023 M ADP 0.1 毫升

0.0072 M NADH 0.1 毫升

0.026 M α-酮戊二酸 0.1 毫升

1.8 M 尿素 0.1 毫升

GLDH (500 單位/毫升) 0.1 毫升

在分光光度計(jì)中于 25°C 孵育 5-10 分鐘以達(dá)到溫度平衡并確定空白率（如果有）。由于試劑中的微量氨，可能會(huì)觀察到吸光度的輕微變化。在吸光度變化為零后，加入 0.1 ml 適當(dāng)稀釋的酶。記錄 A 340減少8-10 分鐘。從曲線的線性部分確定 ΔA 340 /分鐘?？赡軙?huì)出現(xiàn)輕微的延遲。

Worthington核心酶：包括：膠原蛋白酶，脫氧核糖核酸酶I，彈性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶等。

Worthington主要研究覆蓋生物技術(shù)和生命科學(xué)研究，診斷，生物制藥和生物加工應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶，蛋白質(zhì)，核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。