艾美捷Worthington 核糖核酸背景：

核糖核酸是通過 3',5'-磷酸二酯鍵連接的核苷酸的長(zhǎng)鏈聚合物。組成堿基是嘌呤和嘧啶的衍生物，糖是 D-核糖。RNA 核苷酸序列是從 DNA 傳遞的遺傳信息，在蛋白質(zhì)合成中作為氨基酸測(cè)序的模板。參見 JD Watson 的基因分子生物學(xué)第 3 版（WA Benjamin, Inc., Menlo Park, California 1975）中的第 11 章 - DNA 模板上的 RNA 轉(zhuǎn)錄和第 12 章 - RNA 參與蛋白質(zhì)合成。核糖核酸核心由酵母核酸鈉*核糖核酸酶水解后剩余的有限多核苷酸組成。

艾美捷Worthington 核糖核酸化學(xué)結(jié)構(gòu)：

艾美捷Worthington 核糖核酸測(cè)定：

Method : 通過在 RNase 測(cè)定中用作底物來確定作為 RNase 底物的適用性。由于反應(yīng)發(fā)生的速率不同以及從生物來源分離的 RNA 中核苷酸模式的顯著差異，核糖核酸酶活性的標(biāo)準(zhǔn)化一直很困難?？唆斂说热恕?span style="font-family: Calibri;">(1960) 發(fā)表了使用合成底物 2', 3'-磷酸胞苷的測(cè)定。Zimmerman 和 Sandeen (1965) 描述了一種使用ju胞苷酸的靈敏測(cè)定。

Kalnitsky 等人的方法。（1959）在沃辛頓使用。酵母 RNA 在 pH 5.0 的水解速率是通過測(cè)量在規(guī)定條件下釋放的酸溶性寡核苷酸的量來確定的。在zhi定條件下，一個(gè)單位會(huì)導(dǎo)致 A260 在 37°C 和 pH 5.0 下的吸光度增加 1.0。

試劑：

0.10 M 醋酸鈉緩沖液，pH 5.0：將 5.75 ml 冰醋酸溶解在 900 ml 試劑級(jí)水中。用 5 N NaOH 將 pH 值調(diào)節(jié)至 5.0，并用試劑級(jí)水使最終體積達(dá)到 1000 ml。

含有 0.75% 乙酸雙氧鈾的 25% 高氯酸：將 50 ml 70% 高氯酸 (HClO 4 ) 溶解在 90 ml 試劑級(jí)水中。添加 750 mg 乙酸雙氧鈾 (MW 424.15) 并攪拌溶解。

RNA 溶液：將 100 mg Worthington 核糖核酸 (RNA) 溶解在 10 ml 0.1 M 醋酸鈉緩沖液中，pH 5.0 輕輕攪拌以溶解以防止變性。在 0.10M 醋酸鈉 pH 5.0 中以 1:50 稀釋度記錄 A260，以確定 mg RNA/ml。mg RNA/ml = A260 x 稀釋度 x 0.04

在 0.10M 醋酸鈉中稀釋至 2.5 mg/ml RNA，pH 5.0 用于測(cè)定。測(cè)定前在 37°C 下孵育 5-10 分鐘。準(zhǔn)備一份待測(cè) RNA 溶液，以及另一份不同批次 RNA 的溶液用作對(duì)照。

RNAse：

在試劑級(jí)水中制備 1 mg/ml 的儲(chǔ)備溶液。

在即將進(jìn)行測(cè)定之前，在 0.10 M 醋酸鈉，pH 5.0 中進(jìn)一步稀釋至每毫升 2、4 和 6 微克。

程序：

確定 % Native RNA：將 10 mg RNA 溶解在 10 ml 0.015% NaCl 中。在 NaCl 中按 1:50 稀釋，將 3 ml 移液器移入比色杯中，在 260 nm 和 320 nm 處讀數(shù)。加入 0.2 ml 5N NaOH（新鮮，儲(chǔ)存在塑料中）。在 260 和 320 nm 處讀取。在 37°C 下靜置一小時(shí)。在 260 和 320 nm 處讀取。確定 % Native：（如果低于 60%，請(qǐng)聯(lián)系主管。）。

A320 是對(duì)無關(guān)背景的檢查。

RNase Blank Assay：（可通過 RNase 檢測(cè)設(shè)置）為樣品 RNA 設(shè)置空白，為測(cè)試 RNA 設(shè)置空白。將 1 ml 0.10M 醋酸鈉緩沖液 pH 5.0 移入離心管中。平衡至 37°C。加入一毫升 RNA 溶液（2.5 毫克/毫升）。讓我們?cè)?nbsp;37°C 設(shè)置一小時(shí)。然后加入一毫升乙酸雙氧鈾-高氯酸溶液。轉(zhuǎn)移到冰浴中冷卻 5 分鐘。離心澄清并用試劑級(jí)水將 0.1ml 澄清上清液稀釋至 3.0ml。閱讀 A260 與空白。在 37°C 下，空白在一小時(shí)內(nèi)不應(yīng)增加超過 50%。

RNase Assay： 為樣品設(shè)置一組試管，為對(duì)照設(shè)置一組試管。包括帶有樣品管組的空白和帶有對(duì)照管組的空白。移取一毫升相應(yīng)的酶稀釋液到離心管中；吸取 1 ml 0.10M 醋酸鈉緩沖液 pH 5.0 到空白管中。將所有試管在 37°C 下孵育 58 分鐘。每隔一段時(shí)間，將 1 ml RNA 溶液 (2.5 mg/ml) 添加到所有試管（樣品、對(duì)照和空白）中。將每管準(zhǔn)確孵育 4 分鐘，加入 1 ml 乙酸雙氧鈾-高氯酸溶液終止反應(yīng)。轉(zhuǎn)移到冰浴中冷卻 5 分鐘。離心澄清并用試劑級(jí)水將 0.1 ml 澄清的上清液稀釋至 3.0 ml。閱讀 A260 與空白。

計(jì)算

單位/mg dw = (A260 - 空白) x 30 x 稀釋 x 標(biāo)準(zhǔn)化因子

注意：由于用作底物的 RNA 來源于天然來源，因此會(huì)出現(xiàn)批次間差異。為了克服這一點(diǎn)，運(yùn)行核糖核酸酶標(biāo)準(zhǔn)并將值調(diào)整為標(biāo)準(zhǔn)。示例：如果分配給標(biāo)準(zhǔn)的值為 2500 u/mg，而獲得的標(biāo)準(zhǔn)值為 2000 u/mg，則將 1.25 的系數(shù)應(yīng)用于化驗(yàn)值。

Worthington核心酶：包括：膠原蛋白酶，脫氧核糖核酸酶I，彈性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶等。

Worthington主要研究覆蓋生物技術(shù)和生命科學(xué)研究，診斷，生物制藥和生物加工應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶，蛋白質(zhì)，核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。