艾美捷Worthington己糖激酶酶促反應(yīng)：

己糖激酶以兩種不同的形式從酵母細(xì)胞中分離出來，稱為 PI 和 P-II (Schulze et al . 1969)。這些是獨(dú)立的、不可相互轉(zhuǎn)化的同工酶（Womack等人1973）。

艾美捷Worthington來自酵母的己糖激酶的特性：

分子量：天然形式的分子量約為 100,000 (Schulze et al . 1969)，由分子量略高于 50,000 (Schmidt et al . 1973) 的多肽鏈組成。

最佳 pH 值：7.5 - 9.0 (Sols et al . 1958)。

組成： PI 和 P-II 都含有相同的氨基末端纈丨氨酸和相同的羧基末端丙丨氨酸。Schmidt等人已經(jīng)報(bào)道了氨基酸組成。（1973b）。

消光系數(shù)：消光系數(shù)PI 為 8.85，P-II 為 9.47（Schmidt等人1973）。

等電點(diǎn)：PI, 5.25 和 P-II, 4.93 (Schmidt et al . 1973)。

抑制劑：酶被與 SH 基團(tuán)反應(yīng)的化合物抑制。它還被 1-磷酸山梨糖、多磷酸鹽、6-脫氧-6-氟葡萄糖、2-C-羥基-甲基葡萄糖、木糖和來蘇糖抑制（Sols 等人 1958 和 McDonald 1955）。

活化劑：己糖激酶的催化活性需要鎂離子。它被兒茶酚胺和相關(guān)化合物激活 (Harrison et al . 1972)。鈣離子不影響酶活性。

特異性：該酶磷酸化 D-果糖、5-酮基-D-果糖（Avigrad等人1968）、D-葡萄糖、2-脫氧-D-葡萄糖、D-甘露糖和 D-葡糖胺。已證明 ATP 和 ITP 在酵母己糖激酶反應(yīng)中發(fā)生轉(zhuǎn)磷酸化 (Martinez 1961)。PI 與果糖的活性是葡萄糖的 2.6 倍，而 P-II 的果糖:葡萄糖比為 1:3 (Lazarus et al . 1966)。Bessell等人已經(jīng)廣泛研究了酵母己糖激酶的底物特異性。（1972）。

穩(wěn)定性：凍干制劑和結(jié)晶懸浮液在 2-8°C 下可穩(wěn)定 6-12 個(gè)月。

艾美捷Worthington己糖激酶測定：

Method : 該測定基于通過與葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的偶聯(lián)反應(yīng) 減少NAD + ，并通過測量340 nm處吸光度的增加以分光光度法測定。

在指丨定條件下，在 30°C 和 pH 8.0 條件下，一個(gè)活性單位每分鐘可減少 1 微摩爾 NAD + 。

試劑：

1.0.05 M Tris*HCl 緩沖液，pH 8.0，含 13.3 mM MgCl 2

2.0.67 M 葡萄糖在上述 Tris?MgCl 2緩沖液中

3.16.5 mM 腺苷 5'三磷酸在上述 Tris?MgCl 2緩沖液中

4.6.8 mM NAD 在上述 Tris?MgCl 2緩沖液中

注意：NAD 的鹽形式和水合程度可能會(huì)有所不同。應(yīng)小心使用分析級(jí)和正確的分子量。

腸系膜明串珠菌葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（Worthington 代碼：ZF 或 ZFL）。以 300 IU/ml 的濃度溶解在上述 Tris?MgCl 2緩沖液中。使用期間儲(chǔ)存于 0 - 4°C。

酶：

溶解在 Tris?MgCl 2緩沖液中，pH 8.0 以獲得 0.02 - 0.04 ΔA/min 的速率。

程序：

將分光光度計(jì)調(diào)整到 340 nm 和 30°C。

將移液器移入每個(gè)比色皿，如下所示：

Tris?MgCl2 緩沖液 2.28 毫升

0.67 M 葡萄糖 0.50 毫升

16.5 毫米三磷酸腺苷 0.10 毫升

6.8 毫米 NAD 0.10 毫升

G-6-PDH 0.01 毫升

在分光光度計(jì)中 30°C 孵育 6-8 分鐘以達(dá)到溫度平衡并建立空白率（如果有）。在零時(shí)，加入 0.1 ml 稀釋的己糖激酶溶液并*混合。記錄 A 340增加3-4 分鐘。從曲線的初始線性部分確定 ΔA/min。

Worthington主要研究覆蓋生物技術(shù)和生命科學(xué)研究，診斷，生物制藥和生物加工應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶，蛋白質(zhì)，核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。