組織解離/原代細(xì)胞分離和細(xì)胞收獲是酶在組織培養(yǎng)研究和細(xì)胞生物學(xué)研究中的主要應(yīng)用。  盡管多年來(lái)在這些應(yīng)用中廣泛使用酶，但它們?cè)诮怆x和收獲中的作用機(jī)制尚不清楚。  因此，選擇一種技術(shù)而不是另一種技術(shù)通常是武斷的，并且更多地基于過(guò)去的經(jīng)驗(yàn)，而不是對(duì)方法為何有效以及哪些修改可以帶來(lái)更好結(jié)果的理解。

Worthington 艾美捷細(xì)胞分離程序的目標(biāo)是J大限度地提高功能上可行的解離細(xì)胞的產(chǎn)量。  有許多參數(shù)可能會(huì)影響任何特定程序的結(jié)果，包括但不限于：

1.   組織類(lèi)型

2.   原產(chǎn)地物種

3.   動(dòng)物的年齡

4.   基因改造（基因敲除等）

5.   使用的解離介質(zhì)

6.   使用的酶

7.   使用的任何粗酶制劑中的雜質(zhì)

8.   所用酶的濃度

9.   溫度

10. 孵化時(shí)間

前四項(xiàng)通常不是選擇問(wèn)題。 為了獲得合適的結(jié)果，還是根據(jù)經(jīng)驗(yàn)定義其他變量條件。

研究人員在科學(xué)文獻(xiàn)中搜索有關(guān)理想酶和組織解離的最佳條件的信息時(shí)，經(jīng)常會(huì)遇到相互矛盾的數(shù)據(jù)。  大部分變化源于細(xì)胞外基質(zhì)的復(fù)雜性和動(dòng)態(tài)性，以及在細(xì)胞分離應(yīng)用中使用相對(duì)粗糙、不確定的酶制劑的歷史。  此外，細(xì)胞外基質(zhì)由多種蛋白質(zhì)、糖蛋白、脂質(zhì)和糖脂組成，所有這些物質(zhì)的豐度因物種、組織和發(fā)育年齡而異。  常用的粗酶制劑如 Pronase、NF 1:250 和膠原酶含有多種濃度不同的蛋白酶，以及多種多糖酶、核酸酶和脂肪酶。

本指南總結(jié)了我們關(guān)于這些酶如何完成組織解離和細(xì)胞收獲的“常規(guī)"操作的知識(shí)，描述了標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室程序，提供了建立細(xì)胞分離方案的合乎邏輯的實(shí)驗(yàn)方法，并列出了許多組織特異性參考文獻(xiàn)。

關(guān)于Worthington 艾美捷組織解離常見(jiàn)的部分問(wèn)題解答：

1.什么是膠原酶 (CLS) 可接受的酶稀釋劑？

膠原酶可以直接溶解在pingheng鹽溶液或選擇的緩沖液中。它應(yīng)該通過(guò) 0.22um 孔徑的膜進(jìn)行無(wú)菌過(guò)濾。其適合pH范圍為7-9。

2.新生兒心肌細(xì)胞分離系統(tǒng)（NCIS 試劑盒）可以用于成人嗎？

NCIS 試劑盒專(zhuān)門(mén)為五個(gè)獨(dú)立的組織解離而包裝，每個(gè)包含多達(dá)十二個(gè)新生大鼠心臟。成年大鼠心肌細(xì)胞通常需要灌注，即。Langendorf 灌注系統(tǒng)和II 型膠原酶。

3.Worthington 艾美捷Hank's、Earle's 和 Leibovitz L-15 Media 的數(shù)量是多少？

NCIS（新生兒心肌細(xì)胞分離系統(tǒng)）試劑盒中提供無(wú)菌不含鈣和鎂的 Hank pingheng鹽溶液。

NCIS 套件還包含一袋 Leibovitz L-15 Media Powder。將袋中的全部?jī)?nèi)容物重新溶解到含有 800 毫升細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)水的燒杯中。用額外的 100 毫升沖洗糞便 2-3 次。使總體積達(dá)到 1 升并通過(guò) 0.22 微米孔徑的過(guò)濾器過(guò)濾。裝有 1 升 Leibovitz L-15 Media 粉末的袋子是目錄號(hào)LK003250。

Worthington專(zhuān)注于生物技術(shù)和生命科學(xué)研究，診斷，生物制藥和生物加工應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶，蛋白質(zhì)，核酸和試劑盒。其核心酶包括：膠原蛋白酶，脫氧核糖核酸酶I，彈性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，yi蛋白酶等。艾美捷科技是Worthington的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。