環(huán)氧合酶（COX，又稱前列腺素H合酶或PGHS）是一種具有COX和過氧化物酶活性的雙功能酶。環(huán)氧合酶組分將花生四烯酸轉(zhuǎn)化為氫過氧化物內(nèi)過氧化物（PGG2），過氧化物酶組分將內(nèi)過氧化物還原為相應(yīng)的醇（PGH2），即PGs、血栓素和前列環(huán)素的前體。

現(xiàn)在已經(jīng)確定COX有兩種不同的亞型。COX-1在多種細(xì)胞類型中組成性表達(dá)，并參與正常細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)。多種刺激物，如佛波酯、脂多糖和細(xì)胞因子，導(dǎo)致第二種COX亞型COX的誘導(dǎo)表達(dá).在急性炎癥條件下，COX-2負(fù)責(zé)PGs的生物合成。這種誘導(dǎo)型COX-2被認(rèn)為是非甾體抗炎藥抗炎活性的靶酶。

艾美捷COX熒光抑制劑篩選試驗為篩選綿羊COX-1和人類重組COX-2的同工酶特異性抑制劑提供了一種方便的基于熒光的方法。該分析利用了柯薩病毒的過氧化物酶成分。PGG2和ADHP（10-乙酰基-3,7-二羥基苯惡嗪）之間的反應(yīng)產(chǎn)生高熒光化合物resorufin。

使用板塊上的井沒有特定的模式。然而，有需要將三個孔指丨定為非酶或背景孔。這些孔的熒光須從COX孔中測得的熒光中減去。建議對每個COX樣品進(jìn)行一式三份的分析。

艾美捷COX熒光抑制劑篩選試劑盒實驗注意事項：

•所有孔中的分析最終體積為200µl。

•在分析中使用稀釋的分析緩沖液。

•所有試劑（酶除外）須平衡至室溫在開始化驗之前。

•無需一次性使用板上的所有孔。

•不必同時使用這兩種酶。可以使用COX-1或COX-2進(jìn)行研究。

•建議化驗樣品一式三份，但用戶可自行決定。

•可對30個抑制劑樣品進(jìn)行一式三份或四十六份的分析。

•在室溫下進(jìn)行分析。

•用530-540 nm的激發(fā)波長和585-595 nm的發(fā)射波長監(jiān)測熒光。

•在靠近熒光計的位置啟動花生四烯酸反應(yīng)，因為有必要在反應(yīng)開始兩分鐘后讀取平板。