小G蛋白的共同特點(diǎn)是，當(dāng)結(jié)合了GTP時(shí)即成為活化形式，這時(shí)可作用于下游分子使之活化，而當(dāng)GTP水解成為GDP時(shí)（自身為GTP酶）則恢復(fù)到非活化狀態(tài)（分子開(kāi)關(guān)），正常情況下，在細(xì)胞中，小G蛋白會(huì)在跟GDP結(jié)合的“關(guān)閉狀態(tài)"和 GTP 結(jié)合的“開(kāi)啟狀態(tài)"之間循環(huán)，這種循環(huán)過(guò)程主要由細(xì)胞內(nèi)的小G蛋白調(diào)節(jié)因子來(lái)控制，胞內(nèi)小G蛋白調(diào)節(jié)因子主要有兩類：一類是可以增強(qiáng)小G蛋白的活性的鳥(niǎo)苷酸交換因子（guanine nucleotide exchange factor, GEF），另一類是可以降低小G蛋白活性的GTP酶活化蛋白（GTPase activating protein, GAP）。

接下來(lái)就主要來(lái)聊一聊小G蛋白活性增強(qiáng)劑——鳥(niǎo)苷酸交換因子（GEF），GEF 是通過(guò)催化其目標(biāo) GTPase上的核苷酸交換來(lái)發(fā)揮作用，GEF與核苷酸結(jié)合的 GTPase 結(jié)合，這會(huì)導(dǎo)致結(jié)合的核苷酸被釋放，從而產(chǎn)生不含核苷酸的GEF-GTPase 反應(yīng)中間體。這種不含核苷酸的復(fù)合物隨后將結(jié)合新的核苷酸，然后GEF再?gòu)?span style="font-family: Calibri;">GTPase 中釋放出來(lái)。

由于GEFs對(duì)GDP-GTPases的親和力高于對(duì)相應(yīng)GTP-GTPases的親和力，在正常細(xì)胞中GTP和GDP比率約為10:1，GEFs將推動(dòng)從GDP-GTPases到GTP-GTPases的轉(zhuǎn)換。

艾美捷 Cytoskeleton 丨GEF活性檢測(cè)試劑盒，是一款基于熒光法的檢測(cè)GTP酶上的核苷酸轉(zhuǎn)換的試劑盒，可適用于常規(guī)的96孔格式或高通量384孔格式。

Cytoskeleton丨GEF活性檢測(cè)試劑盒組成部分：

1.Exchange Buffer

2.His標(biāo)簽 Cdc42蛋白

3.His標(biāo)簽 Rac1 蛋白

4.His標(biāo)簽 RhoA 蛋白

5.His標(biāo)簽 hDbs 蛋白（作為 Cdc42 和 RhoA 的GEF的陽(yáng)性對(duì)照 ）

6.黑色384孔板

7.黑色96孔板

艾美捷 Cytoskeleton丨GEF活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)原理：

通過(guò)檢測(cè)熒光核苷酸類似物 N-甲基鄰氨基苯甲酰-GTP（mant-GTP）對(duì) GTPase 的結(jié)合情況來(lái)檢測(cè)GEF的活性的。一旦mant-GTP與 GTPase 結(jié)合， mant-GTP的熒光強(qiáng)度（Ex：360 nm，Em：440 nm）顯著增加，通過(guò)檢測(cè)游離的mant-GTP和GTPase 結(jié)合的 mant-GTP 之間的熒光值差異，即可檢測(cè)樣本中GEF的活性。

艾美捷 Cytoskeleton丨GEF活性檢測(cè)試劑盒的主要用途和應(yīng)用:

測(cè)定未知GEFs活性；

小GTPases及其相關(guān)GEFs的生化特性表征；

研究不同輔助因子或蛋白結(jié)構(gòu)域?qū)EF活性的調(diào)控；

篩選GEFs或GTPases突變蛋白的活性和底物特異性；

HTS(高通量篩選)篩選鑒定GEF抑制劑。