Flipper-TR探針研究——活細(xì)胞膜張力檢測(cè)探針?lè)桨?/h1>

時(shí)間：2021-8-30閱讀：386

分享：

Flipper-TR探針如何檢測(cè)熒光壽命變化？

 

熒光Flipper-TR®探針通過(guò)特異性靶向細(xì)胞質(zhì)膜，并通過(guò)其熒光壽命變化來(lái)反映膜張力變化。Flipper-TR®自發(fā)地插入細(xì)胞的質(zhì)膜中，并且僅在插入脂質(zhì)膜時(shí)才會(huì)激發(fā)熒光。探針通過(guò)機(jī)械載體上的兩個(gè)扭曲的二硫噻吩之間的扭轉(zhuǎn)角和J化改變來(lái)感知脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu)的變化（參見(jiàn)圖5）。當(dāng)處于緊張狀態(tài)時(shí)（二硫噻吩并排），發(fā)射壽命更長(zhǎng)（4.1-8.0ns），而在松弛狀態(tài)下（二硫噻吩扭曲），發(fā)射壽命短（2-4ns）。方差（cv）約為0.3ns（cv = 4-15％），這允許在分辨率細(xì)微變化的情況下進(jìn)行高分辨率分析，在FLIM成像過(guò)程中，可將熒光壽命的差異通過(guò)時(shí)間來(lái)展示，一般來(lái)說(shuō)，較短的壽命為綠色，中等壽命為黃色，較長(zhǎng)的壽命為橙色和紅色

 

Flipper-TR的結(jié)構(gòu)和張力檢測(cè)機(jī)制示意圖

左邊：Flipper-TR的基本分子結(jié)構(gòu)

右邊：Flipper-TR低張力時(shí)扭曲（綠色）和高張力時(shí)并列排布（紅色）

 

這些探針的濾光片組件是什么？

 

Flipper-TR探針使用長(zhǎng)分離濾光片組進(jìn)行可視化，因?yàn)槠浼ぐl(fā)峰值比發(fā)射峰值短100 nm以上。因此，理想的濾光片組是488 +/- 20nm的激發(fā)波長(zhǎng)和575-675 +/- 40nm的發(fā)射波長(zhǎng)（圖3）。時(shí)間分辨測(cè)量方法允許非常低的背景，它在水性環(huán)境中具有低熒光。

 

Flipper-TR探針在諸如組織培養(yǎng)基或固定緩沖液等水環(huán)境中的背景非常低，因?yàn)樗?扭曲的狀態(tài)，容易形成膠束并自我淬滅（參考文獻(xiàn)3）。插入膜后，其扭曲度變小，開(kāi)始發(fā)出高熒光。

 

艾美捷Flipper TR膜張力傳感器為研究者們提供了一種快速測(cè)量體內(nèi)膜張力變化的新穎、靈敏、可靠、無(wú)創(chuàng)的研究工具。

上一篇： PsbA|D1 protein of PSII丨D1蛋白C端兔

下一篇： 活細(xì)胞熒光膜張力探針——Flipper TR解