酶聯(lián)免疫斑點實驗 (ELISpot) 是一種可用于對96孔板內(nèi)的一百萬個細(xì)胞中實現(xiàn)對單個分泌細(xì)胞進(jìn)行定量檢測的實驗方法。高靈敏度的ELISpot是一種檢測數(shù)量稀少的細(xì)胞因子分泌細(xì)胞 (30萬個細(xì)胞中才存在1個) 的強(qiáng)效技術(shù)，并被廣泛應(yīng)用于癌癥研究，疾病探索以及疫苗研發(fā)等領(lǐng)域。

ELISpot與傳統(tǒng)ELISA區(qū)別（艾美捷整理如下）：

ELISpot實驗步驟與原理示意 （示意圖如下）

大致原理上分為如下7個步驟，詳情已具體產(chǎn)品說明書為準(zhǔn)

Step.1 包被：將單克隆捕獲抗體添加到乙醇處理的PVDF膜板上

Step.2 細(xì)胞孵育：在有刺激的情況下加入細(xì)胞，孵育，細(xì)胞分泌細(xì)胞因子

Step.3 捕獲分泌物：激活后的細(xì)胞，分泌的細(xì)胞因子被周圍的抗體結(jié)合捕獲

Step.4 檢測抗體：去除細(xì)胞，清洗平板，加入生物素化的檢測抗體

Step.5 鏈霉親和素-酶偶聯(lián)物：加入鏈霉親和素偶聯(lián)物，保證后續(xù)在膜上形成斑點

Step.6 加反應(yīng)底物：當(dāng)酶催化時，顯色底物形成不溶性沉淀

Step.7 結(jié)果分析：在自動點閱讀器中對結(jié)果進(jìn)行分析。每個斑點對應(yīng)一個分析物分泌細(xì)胞

如何挑選合適的ELISpot試劑盒？

針對不同的研究需要，使用不同格式的ELISpot試劑盒，從ELISpotBASIC到完整的ELISpotPRO試劑盒。

艾美捷建議，根據(jù)用戶偏好，比如想要設(shè)置和優(yōu)化實驗，開發(fā)kit的用戶，可使用ELISpot基礎(chǔ)自開發(fā)款，大部分客戶的選擇：ELISpotPLUS預(yù)包被，想要zui短的時間，就選ELISpotPRO一步法。