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艾美捷Fluorochorome BrdU抗體-W與合成的胸苷類似物BrdU反應(yīng),當(dāng)注射到在細(xì)胞周期的S期將動物摻入新合成的DNA鏈中活躍增殖的細(xì)胞。存活的細(xì)胞數(shù)量可以通過免疫細(xì)胞化學(xué)。作為評估一組細(xì)胞增殖狀態(tài)的杰出工具,它對藥物發(fā)現(xiàn)研究至關(guān)重要,特別是在癌癥治療和在ADME/Tox研究期間確定細(xì)胞的健康狀況。BrdU抗體W是一種多克隆抗體在兔體內(nèi)產(chǎn)生針對與牛血清白蛋白(BSA)偶聯(lián)的BrdU的抗體。Fluorochorome的抗體具有已用于大鼠腦組織中的免疫細(xì)胞化學(xué)。它將在吸收濾紙的情況下出售用BrdU進(jìn)行阻塞。這允許研究人員確認(rèn)具體信號。
Fluorochorome BrdU抗體-W(FC60001)的表征:
A、 齒狀回BrdU陽性細(xì)胞
(60倍)的成年老鼠
注射BrdU。在共聚焦顯微鏡上拍攝的照片
B、 齒狀回BrdU阻滯
通過進(jìn)行阻斷研究確定特異性。相鄰部分從將先前注射過BrdU的成年大鼠的海馬與單獨(dú)的BrdU抗體-W(A-60X)或與BrdU(B-60X)預(yù)孵育的BrdU抗體-W。注意在A中標(biāo)記并且在B中沒有標(biāo)記,表明抗體的特異性舞臺調(diào)度。
儲存和準(zhǔn)備:
您將收到的小瓶含有約200μl,稀釋度為1/100。BrdU抗體-W可以在BSA稀釋劑(50mM KPBS,0.4%Triton,1%)中進(jìn)一步稀釋至至少1/30000BSA,1%NGS)??贵w應(yīng)儲存在-20℃。你會收到抗體解凍。重新冷凍除非您打算在48小時內(nèi)使用它。避免多次重新凍結(jié)抗體。還包括用BrdU吸收的濾紙用于阻塞。500μl稀釋的抗體可以加入管中以獲得10μM的塊。在室溫下孵育至少1小時(RT)應(yīng)用于組織之前??贵w特異性地阻斷BrdU并且不阻斷其他肽被濾紙吸收。
Fluorochorome BrdU抗體-W協(xié)議:
將新鮮冷凍的10-30微米切片在4%多聚甲醛(FA)中于室溫固定1小時,在磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中洗滌,然后用50%甲酰胺/2X SSC(300 mM氯化鈉和30 mM檸檬酸鈉)在65°C下放置2小時。這些部分用2倍清洗SSC,在2N HCL中37C培養(yǎng)30分鐘,然后直接置于100mM鈉中在室溫下硼酸鹽(pH8.5)10分鐘。切片在PBS中洗滌并與0.1至0.3%H 2 O 2的PBS溶液10至30分鐘。再次用PBS洗滌組織,然后用PBS處理一種親和素/生-物素阻斷試劑盒(載體cat#SP-2001),用BSA稀釋劑洗滌和孵育在室溫下放置1小時。將BrdU抗體-W(1/30000)在室溫下過夜施用于組織用PBS洗滌將切片在1/1000的生-物素化GAR(Vector labs-cat#BA1000)中于室溫孵育1小時,洗滌,然后在1/1000的抗生-物素蛋白/生-物素(Vector labs-cat#PK6100)中孵育1小時。洗滌后,用二氨基聯(lián)苯胺顯示信號(0.04%)在0.1M乙酸鈉和0.06%H2O2中浸泡6分鐘(氯化鎳2.5%)
也可以添加)。然后將切片水洗(如果需要復(fù)染),脫水并封面滑動。
出版物:
Garcia-Fuster et al, in preparation: Individual differences in adult hippocampal neurogensis following experimenter administration of cocaine.
艾美捷科技是Fluorochorome的中國代理商,為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。
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