ATG8（自噬相關(guān)蛋白8）參與自噬過程中細胞內(nèi)成分的降解和再循環(huán)。ATG8是萊茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）中的分子自噬標記（Pérez-Pérez等人，2010，Plant Physiol.152:1874-88）。

艾美捷ATG8自噬蛋白基本參數(shù)：

中文名稱：ATG8 |自噬相關(guān)蛋白

英文名字：ATG8 | Autophagy-related protein

規(guī)格：50ul

應(yīng)用類型：Immunolocalization (IL), Western blot (WB)

免疫原：Fragment of recombinant ATG8 from Chlamydomonas reinhardtii, UniProt: A8JB85

來源宿主：兔

保存建議：在-20°C下冷凍干燥/復(fù)原儲存；一旦復(fù)原，就進行等分，以避免重復(fù)的凍融循環(huán)。請記得在打開管子之前短暫旋轉(zhuǎn)管子，以避免因材料粘附在管子的蓋子或側(cè)面而造成的任何損失。

對于擬南芥，與葉材料相比，使用ATG8抗體獲得的信號在根的情況下更干凈。為了獲得最佳結(jié)果，請遵循álvarez等人（2012）中描述的提取方案。ATG8信號對應(yīng)于兩條17kDa的帶。

擬南芥細胞提取物的制備：

A、 植物首先受到自噬激活條件的影響：營養(yǎng)（氮或碳）限制或氧化以激活該降解過程。

B、 總蛋白提取物可按álvarez的描述獲得。葉片在液氮中研磨提取緩沖液體積（100mM Tris-HCl pH 8、400mM蔗糖、1mM EDTA、0.1mM苯甲基磺?；铮?span style="font-family: Calibri;">PMSF）、10 mg/ml脫氧膽酸鈉、10µg/ml亮蛋白肽、10µg/ml蛋白抑制素A、4%（v/v）蛋白酶Roche的抑制劑雞尾酒）。

C、 通過在4°C下以500 g離心10分鐘去除細胞碎片。

重要說明：

建議使用更大的凝膠以獲得更好的ATG8譜帶分辨率。Midi protean凝膠更好而不是迷你凝膠。有9種ATG8亞型，這種抗體可能會識別所有這些亞型。

艾美捷ATG8自噬蛋白應(yīng)用實例：

圖2：在15%SDS-PAGE上分離來自萊茵衣藻和擬南芥的15µg總蛋白使用半干法轉(zhuǎn)移的硝化纖維素膜。在室溫（RT）下，用5%的PBS干牛奶在攪拌下封閉印跡1小時。污漬在4oC攪拌下，以1:1 000的稀釋度在一級抗體中孵育過夜。傾析抗體溶液并進行印跡然后在室溫攪拌下在TBS-T中洗滌一次15分鐘和3次5分鐘。在二級培養(yǎng)基中培養(yǎng)印跡抗體（抗兔IgG馬蘿卜過氧化物酶綴合物，AS09 602，來自Agrisera）在5%干牛奶中稀釋至1:10 000，在RT下1小時煽動根據(jù)制造商的說明，如上所述洗滌印跡并用化學(xué)發(fā)光檢測試劑顯影5分鐘說明書暴露時間為60秒。由西班牙IBVF的María Esther Pérez-Pérez博士和Ana M.Laureano Marín提供圖1：根據(jù)Perez Perez等人的研究，用裂解緩沖液提取來自萊茵衣藻的30µg總蛋白，對照（C），自噬誘導(dǎo)（A）2010（植物生理學(xué)152:1874-1888）在15%SDS-PAGE上分離儲罐轉(zhuǎn)移。在室溫（RT）下，用5%的牛奶在攪拌下封閉印跡1h。印跡在一級抗體中孵育在室溫攪拌下，1:1000稀釋1h。傾析抗體溶液并短暫沖洗印跡兩次，然后洗滌一次15并在室溫下在TBS-T中攪拌3次5分鐘。印跡在二級抗體（抗兔IgG馬蘿卜過氧化物酶來自Agrisera AS09 602的綴合物，稀釋至1:25 000）在RT下攪拌1小時。如上所述洗滌印跡，并用化學(xué)發(fā)光檢測試劑。曝光時間為45秒。由西班牙IBVF的María Esther Pérez Perez博士提供

艾美捷ATG8自噬蛋白相關(guān)文獻參考：

Zharova et al. (2022) Role of Autophagy in Haematococcus lacustris Cell Growth under Salinity. Plants. 2022;

11(2):197.

Li et al. (2021) Chloroplast proteotoxic stress-induced autophagy is involved in the degradation of chloroplast proteins1/2 in Chlamydomonas reinhardtii. Plant Cell Physiol. 2021 Feb 17:pcab029. doi: 10.1093/pcp/pcab029. Epub ahead of print. PMID: 33594417.

Li et al. (2021) The unfolded protein response plays dual roles in rice stripe virus infection through fine-tuning the movement protein accumulation. PLoS Pathog. 2021 Mar 4;17(3):e1009370. doi:10.1371/journal.ppat.1009370. Epubahead of print. PMID: 33662041.

Sun et al. (2021) Mechanistic insights into an atypical interaction between ATG8 and SH3P2 in Arabidopsis thaliana.

Autophagy. 2021 Oct 17:1-17. doi: 10.1080/15548627.2021.1976965. Epub ahead of print. PMID: 34657568.

Mishra et al. (2021) Interplay between abiotic (drought) and biotic (virus) stresses in tomato plants. Mol Plant Pathol.2021 Dec 30. doi: 10.1111/mpp.13172. Epub ahead of print. PMID: 34970822.