QuickTiter逆轉(zhuǎn)錄病毒定量試劑盒提供了一種測(cè)定逆轉(zhuǎn)錄病毒滴度的快速方法。該測(cè)定法測(cè)量逆轉(zhuǎn)錄病毒的病毒核酸含量，可以在純化病毒之前或之后進(jìn)行。

Cell Biolabs艾美捷QuickTiter™ 逆轉(zhuǎn)錄病毒定量試劑盒不涉及細(xì)胞感染；相反，它專門測(cè)量純化病毒或未純化病毒的病毒核酸含量上清液樣品（參見測(cè)試原理）。在未純化的病毒上清液的情況下，試劑盒是特別適用于在轉(zhuǎn)導(dǎo)步驟之前測(cè)定上清液滴度。該套件有檢測(cè)靈敏度極限為1.5 X 109病毒顆粒（VP）/mL，足以滿足中高滴度逆轉(zhuǎn)錄病毒樣本。整個(gè)過(guò)程大約需要60分鐘。每個(gè)試劑盒都提供足夠的試劑執(zhí)行20次測(cè)試。QuickTiter™ 逆轉(zhuǎn)錄病毒定量試劑盒提供了一種快速定量的有效系統(tǒng)病毒上清液和純化病毒的逆轉(zhuǎn)錄病毒滴度。

Cell Biolabs艾美捷QuickTiter™ 逆轉(zhuǎn)錄病毒定量試劑盒測(cè)定原理：

1.核酸消化

2.病毒下拉

3.蛋白質(zhì)變性和病毒基因組釋放

4.定量

Cell Biolabs逆轉(zhuǎn)錄病毒定量試劑盒組件：

1. QuickTiter™ Solution A (Part No. 40020): One tube – 200 µL.

2. QuickTiter™ Retrovirus Solution B1 (Part No. 312001): One tube – 800 µL.

3. QuickTiter™ Retrovirus Solution B2 (Part No. 312002): One tube – 800 µL.

4. QuickTiter™ Solution C (2X) (Part No. 40023): Two tubes – 1.5 mL each

5. CyQuant® GR Dye (400X) (Part No. 105101): One tube – 50 µL.

6. QuickTiter™ Retrovirus RNA Standard (Part No. 312003): One tube – 500 µL containing 200

µg/mL retrovirus RNA Standard

存儲(chǔ)：將所有套件組件儲(chǔ)存在4oC。

試劑的制備：

•1X快速滴定儀™ 解決方案C：準(zhǔn)備1X快速滴定儀™ 通過(guò)稀釋提供的2X溶液C在去離子水中貯存1:2。在室溫下儲(chǔ)存稀釋溶液。

•1X CyQuant®GR染料：根據(jù)包括逆轉(zhuǎn)錄病毒RNA標(biāo)準(zhǔn)樣品的測(cè)定數(shù)量。使用前立即準(zhǔn)備1X CyQuant®GR染料，將提供的400X原液在1X TE中稀釋1:400。為了獲得最佳結(jié)果稀釋溶液應(yīng)在制備2小時(shí)后使用。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：

1. 創(chuàng)建200µg/mL、100µg/mL，50µg/mL和25µg/mL的逆轉(zhuǎn)錄病毒RNA標(biāo)準(zhǔn)，…0µg/mL（1:2系列稀釋），標(biāo)記9個(gè)微離心管#1至#9。

2.添加20µL 1X快速滴定儀™ 溶液C至2號(hào)管至9號(hào)管，轉(zhuǎn)移20µL 200µg/mL快速滴定儀™ 逆轉(zhuǎn)錄病毒RNA標(biāo)準(zhǔn)品至1號(hào)管和2號(hào)管。充分混合2號(hào)管，轉(zhuǎn)移20µL將混合物（100µg/mL）輸送至下一管。重復(fù)8號(hào)管的步驟，并將9號(hào)管用作坯料。

3.將每種稀釋液（包括空白）5µL轉(zhuǎn)移至適用于熒光計(jì)的微量滴定板上。添加將95µL 1X CyQuant®GR染料注入含有5µL樣品的每個(gè)孔中。其中熒光板讀取器使用480/520nm濾光片組。

結(jié)果示例：

下圖顯示了典型的定量結(jié)果。應(yīng)使用以下數(shù)據(jù)僅供參考。該數(shù)據(jù)不應(yīng)用于解釋實(shí)際結(jié)果。

圖：逆轉(zhuǎn)錄病毒RNA標(biāo)準(zhǔn)曲線?？焖俚味▋x™ 逆轉(zhuǎn)錄病毒RNA標(biāo)準(zhǔn)按照上述說(shuō)明稀釋。熒光測(cè)量在SpectraMax Gemini XS熒光計(jì)（分子器件），帶485/538 nm濾光片組和530 nm切斷