別藻藍(lán)蛋白 (APC) 是一種從藍(lán)綠藻螺旋藻中分離出來的藻膽蛋白。與其他藻膽蛋白一樣，APC 是熒光的，具有J高的吸收率和高量子效率。它是一種可以通過常規(guī)蛋白質(zhì)交聯(lián)技術(shù)輕松與抗體和其他蛋白質(zhì)連接而不改變其光譜特性的蛋白質(zhì)。APC-Cy7 是流式細(xì)胞術(shù)中常用的顏色。其主要吸收峰在 651 nm，發(fā)射峰在 ~780 nm。

艾美捷預(yù)激活A(yù)PC-Cy7串聯(lián) 以促進 APC-Cy7 與抗體和其他蛋白質(zhì)（如鏈霉親和素和其他二級試劑）的串聯(lián)偶聯(lián)。該預(yù)激活A(yù)PC-Cy7串聯(lián)已準(zhǔn)備好進行偶聯(lián)，與傳統(tǒng)繁瑣的基于 SMCC 的偶聯(lián)化學(xué)相比，其產(chǎn)量要高得多。

圖：艾美捷預(yù)激活A(yù)PC-Cy7串聯(lián) 使用 Buccutite™ FOL（已提供）進行了預(yù)修飾。使用抗體（或其他蛋白質(zhì)）時采用 Buccutite™ MTA（作為免費樣品提供）進行修飾，得到 MTA 修飾的蛋白質(zhì)（例如抗體）。MTA 修飾的蛋白質(zhì)很容易與 FOL 修飾的 APC-Cy7（已提供）反應(yīng)，以比 SMCC 化學(xué)方法高得多的產(chǎn)率產(chǎn)生所需的 APC-Cy7-抗體偶聯(lián)物。該預(yù)激活A(yù)PC-Cy7串聯(lián) 與 MTA 改性的生物聚合物的反應(yīng)濃度遠(yuǎn)低于 SMCC 化學(xué)品。

使用 Buccutite™ MTA 制備預(yù)活化抗體

在 DMSO 中復(fù)溶 Buccutite™ MTA，濃度約為 10 mg/mL。

注意     請將未使用的 Buccutite™ MTA 儲存在 -20 °C 下，最多可使用兩次凍融循環(huán)。

在 pH = 8.5-9.0 緩沖液中制備目標(biāo)抗體 (Ab)，濃度高于 1 mg/mL。

以 8 - 10 µg Buccutite™ MTA/100 µg Ab 的比例將 Buccutite™ MTA 添加到 Ab 溶液中。

充分混合并在室溫下反應(yīng) 60 分鐘，在反應(yīng)過程中旋轉(zhuǎn)。

使用脫鹽柱純化反應(yīng)混合物以去除未反應(yīng)的 Buccutite™ MTA，并將緩沖液更換為 PBS 或您選擇的緩沖液。

收集 Buccutite™ MTA 激活 Ab，并以原始起始量的 70% 產(chǎn)率估算濃度。

艾美捷預(yù)激活A(yù)PC-Cy7串聯(lián)參考文獻（部分）：

Chromophore attachment to phycobiliprotein beta-subunits: phycocyanobilin:cysteine-beta84 phycobiliprotein lyase activity of CpeS-like protein from Anabaena Sp. PCC7120

Authors: Zhao KH, Su P, Li J, Tu JM, Zhou M, Bubenzer C, Scheer H.

Journal: J Biol Chem (2006): 8573

Excitation energy transfer from phycobiliprotein to chlorophyll d in intact cells of Acaryochloris marina studied by time- and wavelength-resolved fluorescence spectroscopy

Authors: Petrasek Z, Schmitt FJ, Theiss C, Huyer J, Chen M, Larkum A, Eichler HJ, Kemnitz K, Eckert HJ.

Journal: Photochem Photobiol Sci (2005): 1016

Single-molecule spectroscopy selectively probes donor and acceptor chromophores in the phycobiliprotein allophycocyanin

Authors: Loos D, Cotlet M, De Schryver F, Habuchi S, Hofkens J.

Journal: Biophys J (2004): 2598

Isolation and characterisation of phycobili