Annexin V是一種磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲丨氨丨酸有高度親和力，它通過(guò)細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲丨氨丨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合，是檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)。
ApoScreen®Annexin V 是一種在大腸桿菌中表達(dá)的重組蛋白。細(xì)胞結(jié)構(gòu)的一些變化在細(xì)胞凋亡過(guò)程中發(fā)生。一個(gè)主要的變化是膜磷脂不對(duì)稱性的喪失，伴隨著磷脂酰絲丨氨丨酸的移位(PS)從磷脂雙層的內(nèi)小葉到外表面。Annexin V 是鈣依賴性磷脂結(jié)合蛋白膜聯(lián)蛋白家族的成員，對(duì)含磷脂酰絲丨氨丨酸(PS)的磷脂雙層具有高度親和力。共軛的Annexin V可用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞膜磷脂不對(duì)稱性的變化，從而提供了一種檢測(cè)細(xì)胞膜磷脂不對(duì)稱性的方便工具凋亡細(xì)胞。
Annexin V建議的染色方案：
1.在冷PBS中清洗細(xì)胞兩次
2.在冷1X ApoScreen®中重新使用電池膜聯(lián)蛋白結(jié)合緩沖液(SB目錄號(hào)10045-01)濃度為1 x 106細(xì)胞/mL
3.加100mL細(xì)胞懸液至5mL聚苯乙烯圓底管
4.加10m共軛ApoScreen®Annexin V
5.輕輕旋轉(zhuǎn)每根試管，在2-8°C溫度下培養(yǎng)15分鐘，并避光
6.在不清洗的情況下，添加~380m冷1X ApoScreen®Annexin 結(jié)合緩沖液到每根管
7.加10mApoScreen®的L7-氨基放丨線丨菌素D(7-AAD；SB分類號(hào)10042-01)或ApoScreen®碘化丙啶(PI；SB類別號(hào)。
Annexin V儲(chǔ)存方式：
1.純化的(UNLB)ApoScreen®Annexin V 以0.1mg純化的重組蛋白形式從PBS中凍干。儲(chǔ)存材料在重構(gòu)前的-20°C溫度下。用1.0毫升的dH2O重新配制。將再造材料儲(chǔ)存在2-8°C的溫度下。
2.熒光素(FITC)和菁5(CY5)ApoScreen®附錄V結(jié)合物在1.0毫升的溶液中作為100次試驗(yàn)提供ApoScreen®Annexin V 結(jié)合緩沖液。在2-8°C下儲(chǔ)存。
3.R-藻紅蛋白(PE)和別藻藍(lán)蛋白(APC)ApoScreen®在1.0毫升PBS/NaN3中，以100次試驗(yàn)的形式提供膜Annexin V結(jié)合物和穩(wěn)定劑。在2-8°C下儲(chǔ)存。不要冷凍！
4.保護(hù)熒光色素結(jié)合物不受光照。如果按照指示儲(chǔ)存，試劑在標(biāo)簽上顯示的時(shí)間內(nèi)是穩(wěn)定的。
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