細(xì)胞名稱:3T3-L1（小鼠胚胎成纖維細(xì)胞）實(shí)驗(yàn)方法
細(xì)胞形態(tài)
成纖維細(xì)胞樣
背景描述
3T3-L1細(xì)胞是通過克隆分離得到的3T3(swiss小白鼠)的連續(xù)亞株。當(dāng)3T3-L1細(xì)胞從快速分裂到長(zhǎng)滿且接觸抑制時(shí)，3T3-L1細(xì)胞經(jīng)過前脂肪向脂肪樣逆轉(zhuǎn)。培養(yǎng)液中，高血清含量可以促進(jìn)3T3-L1細(xì)胞內(nèi)脂肪的積累。
生長(zhǎng)培養(yǎng)基
DMEM高糖(貨號(hào):PM150210)＋10% FBS(貨號(hào):164210-500)＋1% P/S(貨號(hào):PB180120)
培養(yǎng)條件
氣相：空氣，95%；CO2，5%
溫度：37℃
優(yōu)勢(shì)：
1、細(xì)胞株種類齊全，包括腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、耐藥細(xì)胞株，如：人滑膜細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞，人細(xì)胞，人腎近曲小管上皮細(xì)胞，肝癌細(xì)胞，心肌細(xì)胞，子宮內(nèi)膜細(xì)胞等
2、*，專業(yè)的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)指導(dǎo)
3、購(gòu)買本公司的細(xì)胞株，免費(fèi)復(fù)蘇
4、客戶收到細(xì)胞后一天回傳細(xì)胞圖片，三天回傳細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)圖片，五天內(nèi)有問題公司負(fù)責(zé)重發(fā)，超過五天時(shí)限至一個(gè)月內(nèi)重發(fā)細(xì)胞收半價(jià)，超過一個(gè)月重發(fā)全額收費(fèi)。
5、經(jīng)濟(jì)、實(shí)惠、可靠，完善、穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)體系，優(yōu)秀的科研隊(duì)伍，*的實(shí)驗(yàn)設(shè)備、準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細(xì)胞株、抗體、血清、培養(yǎng)基、常用生化試劑、耗材。
操作步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽*儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲(chǔ)存。-20℃不可超過1小時(shí)，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
核轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子YY1抗體 YY1
磷酸化原癌基因Yes相關(guān)蛋白1抗體 Phospho-YAP1(Ser127)
原癌基因*蛋白激酶Yes1抗體 YES1
磷酸化原癌基因*蛋白激酶Yes1抗體 phospho-YES1 (Tyr426)
磷酸化原癌基因*蛋白激酶Yes1抗體 phospho-YES1(Tyr537)
磷酸化zeta相關(guān)蛋白70抗體 Phospho-ZAP70 (Tyr315 + Tyr319)
磷酸化zeta相關(guān)蛋白70抗體 Phospho-ZAP70 (Tyr493)
磷酸化斑聯(lián)蛋白抗體 Phospho-Zyxin (Ser142+Ser143)
鋅指蛋白924抗體 ZBTB41
內(nèi)臟異位相關(guān)蛋白/鋅指蛋白203抗體 ZIC3
鋅指蛋白913抗體 zbtb11
鋅指蛋白450抗體 ZBT24
鋅指蛋白20D3抗體 ZA20D3
鋅指蛋白BED3抗體 ZBED3
鋅指蛋白ZBTB38抗體 ZBTB38
鋅結(jié)合乙醇脫氫酶結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體 ZADH2
鋅指蛋白ZBTB3抗體 ZBTB3
鋅指蛋白ZBBX抗體 ZBBX
鋅指蛋白219抗體 ZFP219
EGF應(yīng)答因子1抗體抗體 ZFP36L1
磷酸化鋅指蛋白36抗體 phospho-ZFP36L1(Ser334)
鋅指蛋白347抗體 ZNF347
鋅指蛋白BED5抗體 ZBED5
鋅指蛋白704抗體 ZNF704
抑癌蛋白5/鋅指蛋白434抗體 ZNF434
ZCWCC1抗體 ZCWCC1
鋅指蛋白300抗體 ZNF300
鋅指蛋白ZBTB39抗體 ZBTB39
鋅指蛋白201抗體 Zic1
鋅指蛋白Zic2抗體 Zic2
鋅指蛋白Zdhhc18抗體 ZDHHC-18
鋅指蛋白Zdhhc12抗體 ZDHHC-12
48T
DR-70TM(Human tumor marker DR-70 for lung cancer) ELISA Kit 人肺癌標(biāo)志物DR-70 48T
FSA(Human fetal sulfoslycoprotein antigen) ELISA Kit 人胚胎性硫糖蛋白抗原 48T
BJP(Human Bence-Jones protein) ELISA Kit 人本周蛋白 48T
CEF(Human Carcinoembryonic Ferritin) ELISA Kit 人癌胚鐵蛋白 48T
SCCAg(Human squamous cell carcinoma related antigen) ELISA Kit 人鱗狀細(xì)胞癌相關(guān)抗原 48T
TSA(Human tumor specific antigen) ELISA Kit 人腫瘤特異性抗原 48T
MMSAM(Human melanoma metastasis surface adhesion molecule) ELISA Kit 人黑色素瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子 48T
BRCA-2(Human breast cancer susceptibility protein 2) ELISA Kit 人癌易感蛋白2 48T
ASK-1(Human apoptosis signal regulating kinase 1) ELISA Kit 人凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶I 48T
BAX(Human Bcl-2 associated X protein) ELISA Kit 人Bcl-2相關(guān)X蛋白 48T
TF(Human Transfer factor) ELISA Kit 人轉(zhuǎn)移因子 48T
CCA(Human Colon Cancer Antigen) ELISA Kit 人結(jié)腸癌抗原 48T
Human H-ras ELISA Kit 人H-ras 48T
Human c-sis ELISA Kit 人c-sis 48T
Human c-jun ELISA Kit 人c-jun 48T
Human c-fos ELISA Kit 人c-fos 48T
c-myc(Human c-myc Oncogene product) ELISA Kit 人c-myc癌基因產(chǎn)物 48T
Smad1(Human Mothers against decapentaplegic homolog 1) ELISA Kit 人Smad1 48T
Smad7(Human Mothers against decapentaplegic homolog 7) ELISA Kit 人Smad7 48T
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