1.產(chǎn)品名稱：兔膀胱平滑肌細胞實驗方法
2.組織來源：膀胱組織
3.產(chǎn)品規(guī)格：5×10^5cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
4.細胞簡介：
兔膀胱平滑肌細胞分離自膀胱組織；膀胱是主要由平滑肌細胞組成的中空器官，膀胱平滑肌的舒張和收縮使得膀胱分別儲存和排出尿液。膀胱平滑肌細胞表型的調(diào)控和可誘導(dǎo)一氧化氮合酶的表達與多種病理狀況有關(guān)，包括膀胱功能障礙。研究表明，組織缺氧抑制膀胱平滑肌細胞的增殖，膀胱平滑肌細胞的分化依賴于膀胱上皮細胞釋放的因子。膀胱平滑肌細胞外基質(zhì)的分泌表型可通過細胞所經(jīng)歷的機械變形頻率而改變。平滑肌是許多疾病中的共同路徑，因此，了解在疾病發(fā)生及持續(xù)過程中平滑肌怎樣變化，這是治療方法取得進展的重要一步。膀胱壁由三層組織組成，由內(nèi)而外為黏膜層、肌層和外膜。其中，肌層主要由平滑肌構(gòu)成。膀胱平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點。體外培養(yǎng)膀胱平滑肌細胞不僅為組織工程膀胱、尿道提供種植細胞的必要手段，也是研究平滑肌瘤的基礎(chǔ)與前提。
本公司的兔膀胱平滑肌細胞采用*-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經(jīng)alpha-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
5.培養(yǎng)基信息：
DMEM[H]、FBS、平滑肌細胞生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
優(yōu)勢：
1、細胞株種類齊全，包括腫瘤細胞、正常細胞、耐藥細胞株，如：人滑膜細胞，人胃癌細胞，人細胞，人腎近曲小管上皮細胞，肝癌細胞，心肌細胞，子宮內(nèi)膜細胞等
2、*，專業(yè)的細胞培養(yǎng)技術(shù)指導(dǎo)
3、購買本公司的細胞株，免費復(fù)蘇
4、客戶收到細胞后一天回傳細胞圖片，三天回傳細胞生長狀態(tài)圖片，五天內(nèi)有問題公司負責(zé)重發(fā)，超過五天時限至一個月內(nèi)重發(fā)細胞收半價，超過一個月重發(fā)全額收費。
5、經(jīng)濟、實惠、可靠，完善、穩(wěn)定的實驗體系，優(yōu)秀的科研隊伍，*的實驗設(shè)備、準確可靠的實驗結(jié)果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細胞株、抗體、血清、培養(yǎng)基、常用生化試劑、耗材。
操作步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
PE-Cy3標(biāo)記的羊抗雞IgG CCR-1(CC chemokine receptor 1)
PE-CY5標(biāo)記的羊抗雞IgG CCR-3(CC chemokine receptor 3)
APC標(biāo)記的羊抗雞IgG CCR-2A(C-C Chemokine receptor 2A)
Alexa Fluor 350標(biāo)記的羊抗雞IgG CCR-4(C-C chemokine receptor 4)
羅丹明標(biāo)記的羊抗雞IgG CCR-6/CD196 peptide
膠體金標(biāo)記的羊抗雞IgG CXCR6(CXC-chemokine receptor 6) peptide
FITC標(biāo)記的羊抗雞IgG CCR-7(CC chemokine receptor 7)
堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的羊抗雞IgG CXCL10/IP-10
辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗雞IgG VEGF(Vascular endothelial growth factor)
堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的羊抗人IgG CD10/CALLA (Neutral Endopeptidase)
羅丹明標(biāo)記的羊抗人IgG ZCWCC1(Zinc finger CW-type coiled-coil domain protein 1)
Cy7標(biāo)記的羊抗人IgG CD138/Syndecan-1
PE標(biāo)記的羊抗人IgG CD146/MCAM
*標(biāo)記的羊抗人IgG ANPEN/CD13(Aminopeptidase N)
Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗人IgG CD14(cluster of differentiation antigen 14)
Alexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗人IgG CD28
PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗人IgG CD166/ALCAM(activated leukocyte celladhesion molecule)
PE-Cy7標(biāo)記的羊抗人IgG CD177/NB1 peptide
Cy3標(biāo)記的羊抗人IgG CD24
Cy5標(biāo)記的羊抗人IgG CD2AP (CD2-associated protein)
Cy5.5標(biāo)記的羊抗人IgG CD33/Siglec-3(mouse ret)
PE-Cy3標(biāo)記的羊抗人IgG CD34
PE-CY5標(biāo)記的羊抗人IgG CD38(mouse, rat)
APC標(biāo)記的羊抗人IgG CD38(human)
釋放酶10 48T
PLC Gamma1(Human Phospholipase C Gamma1) ELISA Kit 人磷酯酶Cγ鏈 48T
NA(Human neuraminidase) ELISA Kit 人神經(jīng)氨酸酶 48T
PIPLC(Human phosphoinositide-specific phospholipase C) ELISA Kit 人磷酯酰肌醇特異性磷酯酶C 48T
PLC(Human Phospholipase C) ELISA Kit 人磷酯酶C 48T
Tyk-2(Human tyrosine kinase2) ELISA Kit 人*激酶2 48T
ICE(Human Interleukin 1 Beta converting enzyme) ELISA Kit 人白介素1β轉(zhuǎn)換酶 48T
ILK-1(Human integrin-linked kinase 1) ELISA Kit 人整合素連接激酶1 48T
CYP21B(Human Cytochrome P450c21/21-hydroxylase) ELISA Kit 人細胞色素P450c21B/21-羥化酶 48T
TdT(Human terminal deoxynucleotidyl transferase) ELISA Kit 人末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶 48T
IDO(Human indoleamine 2,3-dioxygenase) ELISA Kit 人吲哚胺2,3-雙加氧酶 48T
PRSS(Human serine protease) ELISA Kit 人*蛋白酶 48T
Syk(Human spleen tyrosine kinase) ELISA Kit 人脾臟*激酶 48T
STK(Human serine/threonine protein kinase) ELISA Kit 人*/*蛋白磷酸酶 48T
IRAK(Human interleukin receptor associated kinase) ELISA Kit 人白介素受體相關(guān)激酶 48T
UK(Human urokinase) ELISA Kit 人* 48T
PCK(Human phosphoenolpyruvate carboxykinase) ELISA Kit 人磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 48T
Human trypsin ELISA Kit 人*
