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武漢艾美捷科技有限公司
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閱讀：265發(fā)布時間：2021-1-4
關(guān)于核酸檢測，方法還是挺多的，比如常用的分光光度法，和熒光染料法。
一、分光光度法
此法不具有選擇性，無法區(qū)分DNA、RNA或蛋白質(zhì)。檢測數(shù)值J易受到其他污染物(如游離核苷酸、鹽和有機(jī)化合物)和堿基組成差異的影響。
二、熒光染料法
也是今天要重點介紹的，有哪些熒光染料，可以特異地與雙鏈DNA、單鏈DNA、RNA相結(jié)合，并在特定波長光源的激發(fā)下，發(fā)出熒光，并且不會檢測到樣本中可能存在的其他雜質(zhì)分子，熒光強(qiáng)度與樣品中的靶分子濃度相對應(yīng)呢？
一起來看看吧：
首先，是 DNA和RNA定量試劑
Helixyte Green dsDNA定量試劑（17597）和StrandBrite Green RNA定量試劑（17611）分別對雙鏈DNA和單鏈RNA進(jìn)行了優(yōu)化。它們對核酸有很高的親和力，對結(jié)合核酸有J大的熒光增強(qiáng)作用，使得在幾分鐘內(nèi)直接檢測復(fù)雜溶液中微量核酸成為可能，而且一般不會受到其他生物分子的干擾。
小牛胸腺DNA中使用Helixyte 綠色和PicoGreen進(jìn)行DNA定量。由圖看出Helixyte 綠色和PicoGreen 具有幾乎相同的性能。
Helixyte Green是一種出色的核酸定量試劑，與dsDNA結(jié)合后可顯著增強(qiáng)熒光。其優(yōu)勢如下：
高靈敏度：Helixyte Green和StrandBrite Green的靈敏度比UV吸收率測定法高10,000倍
選擇性高：與紫外吸收的測量不同，這些檢測不受蛋白質(zhì)，游離核苷酸或非常短的寡核苷酸的影響，從而使完整的寡核苷酸和核酸的定量在復(fù)雜混合物（例如血清或全血）中更加準(zhǔn)確。
操作簡單：這些檢測方法非常簡單，不需要分離步驟，因此非常適合自動化，高通量篩選
檢范圍廣：對于Helixyte Green的檢測，定量在四個數(shù)量級內(nèi)都是準(zhǔn)確的?；?span style="font-family: Calibri;">StrandBrite 的熒光檢測在三個數(shù)量級上都是準(zhǔn)確的。
1、dsDNA定量
Hoechst 33258,超級純，#AAT-17520
Hoechst染料是一類在顯微觀察中標(biāo)記DNA的熒光染料。因為這類熒光染料能標(biāo)記DNA，所以它們也經(jīng)常用于細(xì)胞核和線粒體的顯像觀察。這類染料中兩個相關(guān)的染料Hoechst 33258和Hoechst 33342經(jīng)常使用。這兩種染料都在紫外光下350nm處被激發(fā)，都在461nm處zui大發(fā)射光附近發(fā)射藍(lán)/青色熒光。Hoechst染料可以用于活細(xì)胞或者固定化細(xì)胞，并且經(jīng)常用來代替其它核酸染料如DAPI。這兩種染料關(guān)鍵的不同點在于，與DAPI相比，Hoechst 33342加有乙基，這使它具有更強(qiáng)的親脂性，因此能更好的透過完整的細(xì)胞膜。在一些實驗中，Hoechst 33258的滲透性明顯比Hoechst 33342要弱些。這些染料也可以用來檢測樣品中的DNA含量，通過繪制發(fā)射光強(qiáng)度與DNA含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2.RNA定量
StrandBrite 綠色RNA定量試劑,200X DMSO 溶液，#AAT-17610
檢測和定量小量RNA在各種分子生物學(xué)應(yīng)用中尤其重要，比如定量體外RNA轉(zhuǎn)錄及測量RNA濃度在準(zhǔn)備進(jìn)行Northern印記雜交，S1p核酸酶分析，RNA酶保護(hù)分析，cDNA文庫制備，逆轉(zhuǎn)錄PCR及DD-PCR。zui常用的是測定核酸濃度技術(shù)，在260nm處測定吸光度?；谖舛鹊姆椒ㄖ饕娜秉c是來自蛋白、游離核苷酸及其他紫外線吸收化合物的干擾。利用靈敏的帶熒光的核酸染色劑可減輕這種干擾狀況。StrandBrite RNA定量試劑是一種可在溶液中對RNA進(jìn)行定量檢測的超靈敏的熒光核酸染色劑。StrandBriteRNA定量試劑可檢測出濃度低至 5 ng/mL的RNA通過熒光酶標(biāo)儀或熒光光度計。
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